TGFβ信號通路可通過S蛋白去磷酸化抑制癌細胞增殖，與該過程有關的N蛋白磷酸化后被激活，可使S蛋白發生磷酸化。藥物SPD可通過影響R蛋白來增強細胞對TGF-β信號通路的響應。為探索藥物SPD治療癌癥的機理，科研人員通過構建基因表達載體來獲得融合蛋白S-HA、N-HA和R-HA。HA是一種短肽，連接在S、N或R蛋白的羧基端（不影響S、N或R的功能），細胞中只有帶HA標簽的融合蛋白能與介質上的HA抗體結合，從而分離得到HA標簽融合蛋白。構建融合蛋白S-HA基因表達載體的模式圖如圖1（注：雙鏈DNA的一條鏈是編碼鏈，另一條鏈是轉錄的模板鏈）。請回答下列問題：
（1）啟動子是 RNA聚合RNA聚合酶識別和結合的位點；組成HA的基本單位是 氨基酸氨基酸。
（2）利用PCR技術擴增S基因并保證其兩端存在限制酶NheⅠ和HindⅢ的識別序列時，需添加的一對引物是 ①③①③（選填下面的數字序號）。在反應體系中添加的dNTP的作用是提供 原料原料和 能量能量。
①5'GCTAGCATGGAC3'
②5'CAGGTACGATCG3'
③5'AAGCTTCCATGGCC3'
④5'AAGCTTTCAGTCTA3'
（3）將擴增后的S基因插入載體上，構建圖1所示的S-HA融合基因表達載體。將重組載體導入大腸桿菌前，先用Ca2+處理大腸桿菌的目的是使其成為 感受態細胞感受態細胞。篩選出符合要求的受體菌后，經適宜條件培養，表達出的蛋白質有S蛋白的氨基酸序列但沒有HA的氨基酸序列，據圖1分析，出現該問題的原因是S基因編碼 終止密碼子終止密碼子未刪除，導致融合基因翻譯提前終止，未表達出HA的氨基酸序列。
（4）融合蛋白表達成功并分離得到R-HA和磷酸化的S-HA、N-HA。將三種融合蛋白按照如表所示的組合方式分別在緩沖液中進行反應，檢測S-HA和N-HA的磷酸化水平。據檢測結果推測R蛋白的作用是對S蛋白和N蛋白 去磷酸化有促進作用去磷酸化有促進作用。
| 分組 | ① | ② | ③ | ④ | |
| 組合方式 | R-HA | - | + | - | + |
| P-S-HA | + | + | - | - | |
| P-N-HA | - | - | + | + | |
| 檢測結果 | P-S-HA |
|
|
||
| P-N-HA |
|
|
（5）向細胞培養液中加入不同濃度SPD，處理相同時間，通過電泳檢測細胞中R蛋白水平，結果如圖2所示。綜合以上研究結果推測，藥物SPD治療癌癥的機理可能是：SPD通過促進
R蛋白表達或者促進R蛋白表達對S蛋白去磷酸化
R蛋白表達或者促進R蛋白表達對S蛋白去磷酸化
，直接或間接降低 S蛋白的磷酸化水平
S蛋白的磷酸化水平
水平，從而抑制癌細胞的增殖。
【答案】RNA聚合；氨基酸；①③；原料；能量；感受態細胞；終止密碼子；去磷酸化有促進作用；R蛋白表達或者促進R蛋白表達對S蛋白去磷酸化；S蛋白的磷酸化水平
【解答】
【點評】
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發布：2024/5/29 8:0:9組卷：15引用：2難度：0.5
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（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6