真菌AFPs基因表達的蛋白質能提高細胞的抗凍能力，將AFPs基因導入番茄中培育抗凍番茄品種，能延長番茄果實的儲存期。科研人員通過轉基因技術培育出超量表達AFPs基因的轉基因番茄。在超量表達AFPs基因載體的構建中，含AFPs基因的DNA片段以及基因表達載體的元件組成情況如圖所示，其中強啟動子能驅動基因的持續轉錄，M基因會影響AFPs基因的表達效果。
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（1）利用PCR技術進行擴增可得到大量的AFPs基因，PCR擴增目的基因時，設計的引物只能與模板鏈在3'端配對，其原因是 DNA聚合酶只能從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸DNA聚合酶只能從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸。
（2）為獲得能正確表達的重組質粒，應分別使用哪些限制酶對質粒、含強啟動子和AFPs基因的DNA片段進行切割：BamHⅠ、XhoⅠBamHⅠ、XhoⅠ、BamHⅠ、SalⅠBamHⅠ、SalⅠ。
（3）已知基因表達載體乙的長度為6.7Kb,M基因片段長度為0.6kb,強啟動子+AFPs基因片段的長度為2.8kb,推測表達載體甲的長度約為 4.54.5kb。
（4）抗凍相關基因超量表達依賴于適宜的啟動子。啟動子可分為組成型啟動子（每種組織器官中均發揮作用）、組織特異型啟動子（特定組織器官中才能發揮作用）和誘導型啟動子（特定條件刺激下才能發揮作用），構建基因表達載體時可單獨使用某一類型的啟動子，也可組合使用多種類型的啟動子。從減少物質和能量消耗的角度出發，最好選擇 誘導型啟動子誘導型啟動子，使番茄果實在寒冷刺激下才啟動抗寒基因的表達。
（5）對轉基因番茄植株進行鑒定時發現，有些植株雖有AFPs基因，但幾乎沒有AFPs蛋白，造成該現象的原因可能有 基因轉化過程中強啟動子可能丟失或斷裂，未能真正轉化成功；雖然轉化成功，但是AFPs基因保持沉默，不能有效表達基因轉化過程中強啟動子可能丟失或斷裂，未能真正轉化成功；雖然轉化成功，但是AFPs基因保持沉默，不能有效表達。（答出2項即可）
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】DNA聚合酶只能從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸；BamHⅠ、XhoⅠ；BamHⅠ、SalⅠ；4.5；誘導型啟動子；基因轉化過程中強啟動子可能丟失或斷裂，未能真正轉化成功；雖然轉化成功，但是AFPs基因保持沉默，不能有效表達
【解答】
【點評】
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發布：2024/8/8 8:0:9組卷：16引用：1難度：0.5
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
發布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6