原生質體制備需要在較高滲透壓的甘露醇溶液中進行。為了探究原生質體制備中甘露醇的適宜濃度，某實驗小組設計了以下實驗。請以原生質體數目和體積變化為檢測指標，根據提供的實驗材料完善實驗思路，預測實驗結果并分析。
材料與用具：某植物單細胞懸液，2mol/L的甘露醇溶液，細胞壁水解酶，蒸餾水，培養瓶，血細胞計數板，顯微鏡（具有測距功能）等。
（要求與說明：原生質體計數和原生質體體積測量的具體操作過程不作要求，不考慮加入單細胞懸液對甘露醇溶液濃度的影響）
（1）實驗思路：
①將2mol/L的甘露醇溶液按濃度梯度稀釋后分為若干組，調節溶液

pH

pH

后加入各組培養瓶，再加入細胞壁水解酶。
②向各組培養瓶中加入適量的單細胞懸液。
③一段時間后，

用血細胞計數板和顯微鏡進行原生質體數目和體積測定

用血細胞計數板和顯微鏡進行原生質體數目和體積測定

。
④對實驗數據進行統計分析。
（2）預測實驗結果（設計一個坐標系，用曲線表示預測的實驗結果）：

。
（3）分析與討論
①除了酶解法以外，還可以將愈傷組織通過

液體懸浮培養

液體懸浮培養

法制備成單細胞懸液。
②可用血細胞計數板對原生質體進行計數，一般計數總數不少于300個細胞?，F有一計數板，計數區共25個中格，每個中格有16個小格，采用五點采樣法，計數的每個小格中應平均不少于

4

4

個原生質體（四舍五入取整數）。
③當甘露醇溶液濃度低于一定值時，原生質體的數目開始減少，原因是

甘露醇溶液濃度小于部分原生質體內部濃度，部分原生質體吸水漲破

甘露醇溶液濃度小于部分原生質體內部濃度，部分原生質體吸水漲破

，所以要使用較高濃度的甘露醇溶液；但是甘露醇溶液濃度也不能太高，因為濃度過高的甘露醇溶液會讓原生質體

過度失水

過度失水

，從而降低原生質體活性。檢測原生質體活性時可用細胞的

呼吸速率

呼吸速率

為指標。