經過基因工程改造的、能生產人胰島素的大腸桿菌是一種特殊的“工程菌”。所用運載體（普通質粒）結構如圖1，目的基因如圖2。回答下列問題：
（1）該過程中最重要的環節是基因表達載體的構建，方法是選用 XX（填“X”或“Y”）限制酶同時處理質粒和目的基因，再用 DNA連接酶DNA連接酶處理使之成為重組質粒。構建好的基因表達載體中含有啟動子，啟動子是指 RNA聚合酶識別、結合并啟動轉錄的DNA片段產熱量大于散熱量RNA聚合酶識別、結合并啟動轉錄的DNA片段產熱量大于散熱量。
（2）將上述重組質粒導入大腸桿菌時，應選用 Ca2+Ca2+處理大腸桿菌，使其成為感受態細胞。
（3）將目的基因導入受體菌時，常出現三種情況：未轉化的細菌、含空載體（普通質粒）的細菌、含重組質粒的細菌。圖3是含人胰島素基因的重組質粒的“工程菌”的篩選示意圖。
圖3中的 B和DB和D（用圖中字母作答）菌落為含有目的基因的“工程菌”。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】X；DNA連接酶；RNA聚合酶識別、結合并啟動轉錄的DNA片段產熱量大于散熱量；Ca2+；B和D
【解答】
【點評】
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