人體內的t-PA蛋白能高效降解由纖維蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和腦血栓的急救藥。然而，為心梗患者注射大劑量的基因工程t-PA會誘發顱內出血，其原因在于t-PA與纖維蛋白結合的特異性不高。研究證實，將t-PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸，能顯著降低出血副作用。據此，先對天然的t-PA基因進行序列改造，然后再采取傳統的基因工程方法表達該改造后的基因，可制造出性能優異的改良t-PA蛋白。（注：如圖表示相關的目的基因、載體及限制酶。pCLY11為質粒，新霉素為抗生素。）
請回答下列問題：
（1）以上制造出性能優異的改良t-PA蛋白的過程被稱為 蛋白質蛋白質工程。
（2）已知人t-PA基因序列已測出，且第84位半胱氨酸的模板鏈堿基序列為ACA，而絲氨酸的模板鏈堿基序列為AGA，因此要獲得改造后的目的基因最好采用 化學方法人工合成化學方法人工合成方法獲得。
（3）若t-PA改良基因的粘性末端如圖所示，那么需選用限制酶XmaⅠ和 BgLIIBgLII切開質粒pCLY11，才能與t-PA改良基因高效連接。在基因工程中，最核心的一步為 基因表達載體的構建基因表達載體的構建。
（4）一般選擇在未加入新霉素的培養基中生存的大腸桿菌作為受體細胞，目的是 以便篩選出導入質粒pCLY1I的大腸桿菌以便篩選出導入質粒pCLY1I的大腸桿菌。在加入新霉素的培養基中形成菌落的受體細胞并非都是目的菌株，原因是 未連目的基因的質粒也可以在這種培養基上生長未連目的基因的質粒也可以在這種培養基上生長，這時需選擇呈 白白色的菌落，進一步培養、檢測和鑒定，以選育出能生產改良t-PA蛋白的工程菌株。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】蛋白質；化學方法人工合成；BgLII；基因表達載體的構建；以便篩選出導入質粒pCLY1I的大腸桿菌；未連目的基因的質粒也可以在這種培養基上生長；白
【解答】
【點評】
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發布：2024/4/20 14:35:0組卷：16引用：1難度：0.7
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