學習以下材料，回答（1）～（5）題。
                                                 CRISPR/Cas基因編輯技術的脫靶檢測
1987年，科學家發現大腸桿菌基因組DNA中有一些重復結構：一段29個堿基的序列反復出現了多次，兩兩之間都被32個堿基形成的看似無規律的間隔序列隔開，這種重復結構被命名為CRISPR（圖1）。進一步研究發現，多種細菌均有CRISPR結構，且很多間隔序列與侵染細菌的一些噬菌體基因組序列一致。CRISPR的間隔序列轉錄形成的RNA（sgRNA）在細胞內與Cas9酶結合成復合體，一旦在細胞中發現能與sgRNA配對的DNA分子，Cas9酶就會對該DNA分子進行切割，破壞其功能（圖2）。

科學家基于此，構建了對DNA序列進行定點切割的CRISPR/Cas9基因編輯技術。將編碼Cas9酶和sgRNA的基因作為目的基因，構建基因表達載體后導入受體細胞，可對細胞內某個基因定點切割，引發被切割部位的隨機突變?？蒲腥藛T在CRISPR/Cas9編輯系統基礎上開發了CBE單堿基編輯系統，將Cas9酶替換成CBE融合蛋白，能將靶位點的胞嘧啶C脫氨基成尿嘧啶U，進而通過DNA復制實現堿基對替換。
基因編輯可能造成非目標序列的堿基改變，稱為脫靶。我國科研工作者建立了一種脫靶檢測技術，在小鼠受精卵分裂到2細胞時期，編輯其中1個，胚胎繼續發育到14.5天時，利用細胞分選技術選出被編輯過和未被編輯過的細胞，再進行DNA提取和全基因組測序，比較兩組差異（圖3）。脫靶檢測發現CRISPR/Cas9編輯系統脫靶率較低，而CBE系統脫靶率較高，必須加以改進才能應用于遺傳病的臨床治療。

（1）列表比較限制性內切核酸酶和CRISPR/Cas9復合體作用的異同點

	限制酶	CRISPR/Cas9
不同點	識別、切割DNA的特定核苷酸序列	根據sgRNA識別與之配對的DNA分子后進行切割，且能引發突變
相同點	均能切割DNA

	限制酶	CRISPR/Cas9
不同點	識別、切割DNA的特定核苷酸序列	根據sgRNA識別與之配對的DNA分子后進行切割，且能引發突變
相同點	均能切割DNA

。
（2）大腸桿菌不同菌株CRISPR區域中的間隔序列是不同的，導致這種差異最可能的原因是

不同菌株的祖先種感染的噬菌體有差異

不同菌株的祖先種感染的噬菌體有差異

。
（3）CBE編輯系統將靶位點胞嘧啶脫氨基后，細胞復制

2

2

次后，子代DNA中靶位點堿基對由C-G徹底替換成

T-A

T-A

，實現單堿基編輯。
（4）小鼠受精卵可以從雌鼠輸卵管中采集或通過

體外受精

體外受精

技術獲得。向2細胞期胚胎中的1個細胞進行顯微注射時，因不需長期在受體細胞中穩定存在和表達，可以以RNA形式注入的有

①②③

①②③

（填序號）。
①Cas9 mRNA
②CBE mRNA
③sgRNA
④標記基因RNA
（5）脫靶檢測過程中標記基因的作用是

分選被編輯細胞與未編輯細胞的后代

分選被編輯細胞與未編輯細胞的后代

。與用同一品系小鼠不同受精卵進行脫靶檢測相比，上述脫靶檢測技術更加精準，原因是

來自同一受精卵的基因相同，實驗組和對照組結果差異是基因編輯工具不同造成的

來自同一受精卵的基因相同，實驗組和對照組結果差異是基因編輯工具不同造成的

。