馬鈴薯是重要的塊莖類糧食作物。二倍體馬鈴薯普遍存在自交不親和的現象，導致無法使用種子種植馬鈴薯。二倍體馬鈴薯的自交不親和是由核糖核酸酶基因（S-RNase）控制的，我國科研人員通過基因編輯技術敲除了馬鈴薯的S-RNase基因，獲得自交親和的二倍體馬鈴薯，為馬鈴薯雜交育種提供了全新的技術體系。下圖是科研人員用CRISPR/Cas9基因編輯技術定點敲除S-RNase基因的示意圖，回答下列問題：
（1）用于編輯不同基因的CRISPR/Cas9復合物中向導RNA堿基序列不同，因此首先要確定S-RNase基因中的待編輯序列，可以通過PCR技術擴增S-RNase基因，作為編碼特定向導RNA的模板。擴增時需要根據

S-RNase基因的脫氧核苷酸序列

S-RNase基因的脫氧核苷酸序列

設計引物，引物的作用是

使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸

使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸

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（2）CRISPR/Cas9系統能精準識別相關基因，依據的原理是向導RNA與目標DNA發生

堿基互補配對

堿基互補配對

；Cas9蛋白可催化

磷酸二酯鍵

磷酸二酯鍵

（填化學鍵名稱）水解，剪切特定DNA片段。
（3）欲檢測經上述基因編輯技術得到的植株是否已具有自交親和性狀，最簡便的方法是

讓該植株自交，觀察能否產生種子（或觀察該植株能否自交產生種子）

讓該植株自交，觀察能否產生種子（或觀察該植株能否自交產生種子）

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（4）實驗發現，CRISRP/Cas9基因編輯技術有時存在編輯對象出錯而造成“脫靶”，向導RNA的序列長短影響成功率，序列越短，脫靶率越高。脫靶最可能的原因是

非基因編輯對象也可能含有與向導RNA配對的堿基序列，造成向導RNA與之結合而脫靶

非基因編輯對象也可能含有與向導RNA配對的堿基序列，造成向導RNA與之結合而脫靶

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