如圖所示為A、B、C三種質粒和一個含目的基因D的DNA片段示意圖。圖中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環素抗性基因，lacZ為藍色顯色基因，其表達產物可以將無色化合物X-gal轉化成藍色物質，使大腸桿菌的菌落呈藍色，否則菌落為白色。EcoRⅠ、PvuⅠ為兩種限制酶，質粒上限制酶括號內的數字表示限制酶切割位點與復制原點的距離。請回答：
（1）利用PCR技術對一個目的基因擴增n次，需要 2n-12n-1對引物，熱穩定DNA聚合酶能從引物的 3’3’端開始連接脫氧核苷酸，從而獲得大量目的基因D。
（2）據圖分析，質粒A、C不能作為目的基因D的載體，理由分別是 （質粒A）缺少標記基因、（質粒C）復制原點會被限制酶切割（質粒A）缺少標記基因、（質粒C）復制原點會被限制酶切割。將目的基因D與質粒B進行重組，應該選用的酶有 PvuⅠ和DNA連接酶PvuⅠ和DNA連接酶。
（3）在基因工程的操作過程中，需要檢查目的基因D是否重組到質粒中，使用EcoRI處理重組質粒，完全酶切后，進行電泳檢測。若電泳圖譜中出現長度為1.6kb和3.1kb,或者 0.60.6kb和 4.14.1kb的片段，則可判斷質粒B已與目的基因D重組成功。
（4）利用自身不含lacZ基因且對抗生素敏感的大腸桿菌作為受體細胞，要在已轉化的含重組質粒、已轉化的含空質粒的受體細胞和未轉化成功的細胞中，篩選出已轉化的含重組質粒的受體細胞的方法是：在含有 氨芐青霉素和X-gal氨芐青霉素和X-gal的培養基上培養，形成 白白色菌落的為導入重組質粒的受體細胞。
（5）下列關于基因工程常用運載體——質粒的說法正確的是 ACDACD。
A．使用質粒作為運載體可避免目的基因被分解
B．質粒只有與目的基因重組后才能進入細胞
C．質粒上具有1個至多個限制酶切點，以便于切割后與目的基因連接
D．質粒的復制和表達也遵循中心法則
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】2n-1；3’；（質粒A）缺少標記基因、（質粒C）復制原點會被限制酶切割；PvuⅠ和DNA連接酶；0.6；4.1；氨芐青霉素和X-gal；白；ACD
【解答】
【點評】
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發布：2024/7/5 8:0:9組卷：4引用：2難度：0.5
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發布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6