科研小組利用基因工程技術將“抗蟲基因”轉入棉花細胞成功培育出抗蟲棉，該技術所用的含“抗蟲基因”的DNA與質粒上相關限制酶的酶切位點分別如圖1、圖2所示（不同限制酶的識別序列和酶切位點：BamHⅠ5′-G↓GATCC-3′，BclⅠ5′-T↓GATCA-3′，Sau3AⅠ5′-↓GATC-3′，HindⅢ5′-A↓AGCTT-3′）。請分析并回答下列問題：
（1）通過PCR擴增獲得“抗蟲基因”時，依據 目的基因的脫氧核苷酸序列目的基因的脫氧核苷酸序列設計引物，引物的作用是 使DNA聚合酶（Taq酶）從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸使DNA聚合酶（Taq酶）從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸。
（2）培育轉基因抗蟲棉的核心工作是 構建基因表達載體構建基因表達載體。科研人員分別使用HindⅢ和Sau3AⅠ兩種限制酶處理含目的基因的DNA片段，用HindⅢ和BamHⅠ兩種限制酶處理質粒，試分析切割質粒時用限制酶BamHⅠ替換Sau3AⅠ的原因 限制酶Sau3AⅠ和BamHⅠ酶切以后產生相同的黏性末端限制酶Sau3AⅠ和BamHⅠ酶切以后產生相同的黏性末端。
（3）欲確定“抗蟲基因”是否表達出“抗蟲蛋白”，在分子水平上的檢測方法是 抗原-抗體雜交抗原-抗體雜交，該方法的原理是 抗體與相應的抗原發生特異性免疫反應抗體與相應的抗原發生特異性免疫反應。
（4）生產上常將轉基因抗蟲棉與非轉基因棉花混合播種，目的是 減緩棉鈴蟲種群抗蟲基因頻率的增加速度減緩棉鈴蟲種群抗蟲基因頻率的增加速度。
（5）在基因工程的操作過程中，標記基因在檢測目的基因是否導入受體菌方面廣泛應用。環絲氨酸輔助篩選法：四環素能使細菌停止生長但不致死；環絲氨酸能使正常生長的細菌致死，而對停止生長的細菌不致死。某質粒如圖3所示（Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，Tetr表示四環素抗性基因），Tetr中插入目的基因后失活。
用此質粒構建表達載體，轉化細菌后，結果有3種：未轉化的細菌（無外源DNA進入）、含空質粒（沒有連接目的基因的質粒）的細菌、含重組質粒的細菌。
①用含有 四環素四環素和 環絲氨酸環絲氨酸的培養基對上述3種細菌進行篩選，只有含空質粒的細菌被淘汰，理由是 含空質粒的細菌環絲氨酸使其致死含空質粒的細菌環絲氨酸使其致死。
②在上述篩選的基礎上，若要篩選出含重組質粒的細菌，還需使用含有 氨芐青霉素氨芐青霉素的培養基。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】目的基因的脫氧核苷酸序列；使DNA聚合酶（Taq酶）從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸；構建基因表達載體；限制酶Sau3AⅠ和BamHⅠ酶切以后產生相同的黏性末端；抗原-抗體雜交；抗體與相應的抗原發生特異性免疫反應；減緩棉鈴蟲種群抗蟲基因頻率的增加速度；四環素；環絲氨酸；含空質粒的細菌環絲氨酸使其致死；氨芐青霉素
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：11引用：2難度：0.6
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6