“采菊東籬下，悠然見南山”，菊花是中國十大名花之一，為了增加菊花花色類型，研究者從其他植物中克隆出花色基因C，擬將其與質粒（圖2）重組，再借助農桿菌導入菊花中。請回答相關問題：
（1）研究者從其他植物中克隆出花色基因時，采用了PCR技術擴增，擴增過程需要花色基因C、兩對引物之外，還需要 （4種）脫氧核苷酸（4種）脫氧核苷酸、耐高溫的DNA聚合酶（或TaqDNA聚合酶）耐高溫的DNA聚合酶（或TaqDNA聚合酶）。PCR 反應中的每次循環可分為變性、復性、延伸延伸三步，其中復性是指：當溫度下降到50℃左右時，兩種引物通過堿基互補配對與兩條單鏈DNA結合（兩種引物與單鏈相應互補序列結合）兩種引物通過堿基互補配對與兩條單鏈DNA結合（兩種引物與單鏈相應互補序列結合）。
（2）圖1是花色基因C兩側被EcoRⅠ酶切后所形成的末端結構，請寫出EcoRⅠ酶識別序列并標出切點：
。
（3）為防止目的基因C的自身環化和任意連接，有同學認為可以用EcoRⅠ和BamHⅠ兩種酶切割含C基因的DNA分子和圖中質粒，有同學認為不妥，理由是 花色基因C兩側沒有HamHⅠ的識別序列，不能被BamHⅠ酶切；質粒被EcoRⅠ和BamHⅠ兩種酶切后不能使目的基因連接在啟動子和終止子之間花色基因C兩側沒有HamHⅠ的識別序列，不能被BamHⅠ酶切；質粒被EcoRⅠ和BamHⅠ兩種酶切后不能使目的基因連接在啟動子和終止子之間（答出兩點理由）。
（4）最后需要將重組質粒導入菊花細胞，研究者農桿菌轉化法，這是利用了農桿菌中的Ti質粒的T-DNA的特性：可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體DNA上可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體DNA上。若導入的是菊花體細胞，還需要通過 植物組織培養植物組織培養才能得到菊花植株。
（5）在個體生物學水平上，如何鑒定轉基因菊花培育是否成功？觀察轉基因菊花是否表現出基因C所控制的花色觀察轉基因菊花是否表現出基因C所控制的花色。
【考點】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】（4種）脫氧核苷酸；耐高溫的DNA聚合酶（或TaqDNA聚合酶）；延伸；兩種引物通過堿基互補配對與兩條單鏈DNA結合（兩種引物與單鏈相應互補序列結合）；；花色基因C兩側沒有HamHⅠ的識別序列，不能被BamHⅠ酶切；質粒被EcoRⅠ和BamHⅠ兩種酶切后不能使目的基因連接在啟動子和終止子之間；可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體DNA上；植物組織培養；觀察轉基因菊花是否表現出基因C所控制的花色
；花色基因C兩側沒有HamHⅠ的識別序列，不能被BamHⅠ酶切；質粒被EcoRⅠ和BamHⅠ兩種酶切后不能使目的基因連接在啟動子和終止子之間；可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體DNA上；植物組織培養；觀察轉基因菊花是否表現出基因C所控制的花色【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：9難度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6