同源重組指發(fā)生在同源DNA分子的同源序列（即堿基序列相同或相近）之間的一種重組形式。某實(shí)驗(yàn)小組利用同源重組的方法將綠色熒光蛋白（EGFP）基因插入真核表達(dá)載體的過程如圖所示，其中A～D表示操作流程。回答下列問題：
（1）載體線性化后進(jìn)行的PCR過程中引物的作用是 使DNA聚合酶從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸使DNA聚合酶從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸，與細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制不同，PCR反應(yīng)體系中需要加入 耐高溫的DNA聚合（或TaqDNA聚合）耐高溫的DNA聚合（或TaqDNA聚合）酶。
（2）圖中A、B兩處PCR過程中要在載體和目的基因的兩端添加 同源序列同源序列。重組產(chǎn)物一般會(huì)轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞，獲得感受態(tài)細(xì)胞時(shí)一般先用 Ca2+Ca2+處理細(xì)胞，使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)。
（3）與利用限制酶和DNA連接酶構(gòu)建重組質(zhì)粒的常規(guī)方法相比，用該方法構(gòu)建重組質(zhì)粒的最大優(yōu)點(diǎn)是 構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)不受目的基因以及載體上限制酶位點(diǎn)的限制構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)不受目的基因以及載體上限制酶位點(diǎn)的限制。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】使DNA聚合酶從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸；耐高溫的DNA聚合（或TaqDNA聚合）；同源序列；Ca2+；構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)不受目的基因以及載體上限制酶位點(diǎn)的限制
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/7/5 8:0:9組卷：12引用：5難度：0.8
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得。基因文庫(kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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