2020年中國政府提出“努力爭取2060年前實現碳中和”的目標。發展利用生物能源是實現碳中和的有效途徑。紫蘇種子含大量油脂，出油率達35%～64%，三酰甘油（TAG）是紫蘇種子主要儲藏脂類，DGAT1是TAG合成的關鍵酶。科研人員將紫蘇DGAT1基因導入微藻中，培養高產生物柴油的工程藻，如圖所示。
回答下列問題。
（1）從紫蘇組織細胞中提取總RNA時，需要加入RNA酶抑制劑，目的是 防止RNA酶降解RNA防止RNA酶降解RNA。將RNA逆轉錄合成的cDNA作模板，PCR擴增DGAT1基因，反應體系中需加入 耐高溫的DNA聚合（或Taq DNA聚合）耐高溫的DNA聚合（或Taq DNA聚合）酶，其作用是 將游離的脫氧核苷酸連接到引物3’端，合成DNA子鏈將游離的脫氧核苷酸連接到引物3’端，合成DNA子鏈。為使DGAT1基因兩端分別添加BamHI和HindⅢ識別序列，可將相應序列分別添加在兩種引物的 5′5′（填“5'”或“3'”）端。
（2）構建DGAT1基因表達載體的目的是 讓目的基因在受體細胞中穩定存在，并且可以遺傳給下一代讓目的基因在受體細胞中穩定存在，并且可以遺傳給下一代，并且使DGAT1基因能夠表達并發揮作用。若只考慮DNA片段的兩兩連接，構建表達載體時可得到 33種大小不同的連接產物。利用 瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳方法將不同大小的DNA片段和連接產物分離，再將基因表達載體分離純化導入微藻細胞。
（3）若鑒定微藻基因組中整合有DGAT1基因，不能不能（填“能”或“不能”）說明高產油工程藻已生產成功。理由是 DGAT1基因在微藻細胞中不一定成功表達（或微藻細胞不一定產生TAG、微藻細胞出油率可能不高等）DGAT1基因在微藻細胞中不一定成功表達（或微藻細胞不一定產生TAG、微藻細胞出油率可能不高等）（答出1點即可）。“碳中和”含義是通過計算二氧化碳的排放總量，然后通過植樹等方式把這些排放量吸收掉。與使用石油等化石燃料相比，生產利用產油工程藻的“生物柴油”有利于實現碳中和，原因是 使用化石燃料只會排放CO2，利用產油工程藻生產“生物柴油”需要吸收CO2為原料使用化石燃料只會排放CO2，利用產油工程藻生產“生物柴油”需要吸收CO2為原料。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】防止RNA酶降解RNA；耐高溫的DNA聚合（或Taq DNA聚合）；將游離的脫氧核苷酸連接到引物3’端，合成DNA子鏈；5′；讓目的基因在受體細胞中穩定存在，并且可以遺傳給下一代；3；瓊脂糖凝膠電泳；不能；DGAT1基因在微藻細胞中不一定成功表達（或微藻細胞不一定產生TAG、微藻細胞出油率可能不高等）；使用化石燃料只會排放CO2，利用產油工程藻生產“生物柴油”需要吸收CO2為原料
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：18引用：1難度：0.6
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（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
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