2009年10月，我國自主研發的轉基因抗蟲水稻“華恢1號”獲得農業部頒發的安全證書．圖甲表示該抗蟲水稻主要培育流程，據圖回答：
（1）④過程應用的主要生物技術是植物組織培養植物組織培養．
（2）殺蟲基因（crylA）是人們根據幾種Bt毒蛋白的分子結構，設計并人工合成的，這屬于蛋白質蛋白質工程技術范疇．
（3）組建理想的載體需要對天然的質粒進行改造．下圖是天然土壤農桿菌Ti質粒結構示意圖（示部分基因及部分限制性內切酶作用位點），據圖乙分析：
①人工改造時，要使抗蟲基因表達，還應插入啟動子啟動子．
②人工改造時用限制酶Ⅱ處理，其目的是：第一，去除質粒上的tms和tmrtms和tmr（基因），保證T-DNA進入水稻細胞后不會引起細胞的無限分裂和生長；第二，使質粒帶有單一限制酶作用位點，有利于目的基因（或外源DNA）準確插入目的基因（或外源DNA）準確插入．第三，使質粒大小合適，可以提高轉化效率等．
③若用限制酶Ⅰ分別切割改造過的理想質粒和帶有抗蟲基因的DNA分子，并構成重組Ti質粒．分別以含四環素和卡那霉素的培養基培養已成功導入抗蟲基因的水稻胚細胞，觀察到的細胞生長的現象是在含卡那霉素的培養基能夠生長，而在含四環素的培養基中不能生長在含卡那霉素的培養基能夠生長，而在含四環素的培養基中不能生長．科學家預言，此種“轉基因抗蟲水稻”獨立種植若干代以后，將出現不抗蟲的植株，此現象來源于基因突變基因突變．
（4）由于重組質粒成功導入受體細胞的頻率低低．所以在轉化后通常需要進行篩選篩選操作．
（5）為擴大可耕地面積，增加糧食產量，科學家應用耐鹽基因繼續改良上述抗蟲水稻．
①獲得耐鹽基因后，構建重組DNA分子所用的限制性核酸內切酶作用于圖丙中的aa處，DNA連接酶作用于aa處．（填“a”或“b”）
②將重組DNA分子導入水稻受體細胞的常用方法有農桿菌轉化法、基因槍基因槍法和花粉管通道花粉管通道法．
③為了確定耐鹽轉基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素標記的耐鹽基因（目的基因）耐鹽基因（目的基因）作探針進行分子雜交檢測，又要用一定濃度鹽水澆灌（移栽到鹽堿地中）一定濃度鹽水澆灌（移栽到鹽堿地中）方法從個體水平鑒定水稻植株的耐鹽性．
【考點】植物的組織培養．
【答案】植物組織培養；蛋白質；啟動子；tms和tmr；目的基因（或外源DNA）準確插入；在含卡那霉素的培養基能夠生長，而在含四環素的培養基中不能生長；基因突變；低；篩選；a；a；基因槍；花粉管通道；耐鹽基因（目的基因）；一定濃度鹽水澆灌（移栽到鹽堿地中）
【解答】
【點評】
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