為了研究低溫誘導對某基因的啟動子P活性的影響，科研人員進行了啟動子P的PCR提取、特定表達載體的構建和轉基因煙草的功能鑒定。該基因及其啟動子P的結構及相應限制酶的切割位點如圖1所示，圖中灰色區域堿基序列是已知的，啟動子P（圖中黑色區域）及上游堿基序列未知，片段Ⅰ和片段Ⅱ中的字母A～F均表示引物。請回答下列問題。
（1）啟動子是 RNA聚合酶識別并結合RNA聚合酶識別并結合的位點。不能直接根據片段I擴增啟動子P的原因是 啟動子P及左側的序列未知，無法合成PCR所需要的引物啟動子P及左側的序列未知，無法合成PCR所需要的引物。
（2）為了能擴增正常啟動子P，科研人員先用 酶1和DNA連接酶1和DNA連接酶處理圖中的片段Ⅰ，使片段Ⅰ成為環狀DNA；再將環狀DNA用 酶2酶2（填“酶1”或“酶2”）處理得到了片段Ⅱ，如圖2所示。根據片段Ⅱ能不能擴增出啟動子P？若能，請寫出可選用的引物組合（用C、D、E、F表示），若不能請說明理由 能，可選用的引物組合是D和E能，可選用的引物組合是D和E。
（3）已知卡那霉素可抑制煙草細胞的生長，基因M可在煙草的根部正常表達，其表達產物可將X-Gluc水解生成藍色物質。將啟動子P和基因M結合并與含有卡那霉素抗性基因的Ti-質粒重組構建基因表達載體。將表達載體和酚類物質混合后加入含有煙草細胞的培養基中，酚類物質的作用是 吸引農桿菌感染煙草細胞吸引農桿菌感染煙草細胞。再用含有 卡那霉素和X?Gluc卡那霉素和X?Gluc的培養基篩選出所需的煙草細胞，然后經過植物組織培養獲得轉基因煙草植株。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】RNA聚合酶識別并結合；啟動子P及左側的序列未知，無法合成PCR所需要的引物；酶1和DNA連接；酶2；能，可選用的引物組合是D和E；吸引農桿菌感染煙草細胞；卡那霉素和X?Gluc
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：16引用：1難度：0.5
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（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
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