土壤鹽漬化影響水稻生長發育，將水稻耐鹽堿基因OsMYB56導入不耐鹽堿水稻品種吉粳88中，培育耐鹽堿水稻新品種，其操作流程及可能用到的限制酶如圖，其中bar為抗除草劑基因，Tetr為四環素抗性基因，Ampr為氨芐青霉素抗性基因，①～⑦表示操作過程。
| 限制酶 | BamHⅠ | BclⅠ | SmaⅠ | Sau3AⅠ |
| 識別位點及切割位點 | -G↓GATCC- | -T↓GATCA- | -CCC↓GGG- | -↓GATC- |
5'
5'
（“5'”或“3'”）端，過程①PCR擴增OsMYB56基因時加入的酶催化 磷酸二酯（鍵）
磷酸二酯（鍵）
鍵的形成，還需要添加引物，應選用引物組合 ①④
①④
。①5'-CTTGGATGAT-3'
②5'-TAAGTTGTCT-3'
③5'-TAGTAGGTTC-3'
④5'-TCTGTTGAAT-3
⑤5'-ATTCAACAGA-3'
⑥5'-ATCATCCAAG-3'
（2）根據基因表達載體的結構組成分析，Ti質粒中的CaMV35S是
啟動子
啟動子
，其功能是 RNA聚合酶識別和結合的部位，（啟動轉錄過程）
RNA聚合酶識別和結合的部位，（啟動轉錄過程）
。基因表達載體中，OsMYB56基因和bar基因編碼鏈的方向 相反
相反
（填“相同”或“相反”）。（3）過程③應選用限制酶
BclⅠ和SmaⅠ
BclⅠ和SmaⅠ
切割質粒，利用所選限制酶進行操作的優勢是 防止酶切后的質粒自身環化，保證OsMYB56和酶切后的質粒定向連接
防止酶切后的質粒自身環化，保證OsMYB56和酶切后的質粒定向連接
，切割后需要用 T4DNA連接酶
T4DNA連接酶
進行連接才能獲得重組質粒。（4）為了篩選出含重組質粒的受體細胞，④過程應在添加
四環素
四環素
的選擇培養基上培養。培養后獲得的菌落不能判定是否含有重組質粒，原因是 含未重組Ti質粒（或普通Ti質粒）的受體細胞也能正常生長
含未重組Ti質粒（或普通Ti質粒）的受體細胞也能正常生長
。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】5'；磷酸二酯（鍵）；①④；啟動子；RNA聚合酶識別和結合的部位，（啟動轉錄過程）；相反；BclⅠ和SmaⅠ；防止酶切后的質粒自身環化，保證OsMYB56和酶切后的質粒定向連接；T4DNA連接酶；四環素；含未重組Ti質粒（或普通Ti質粒）的受體細胞也能正常生長
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/12 8:0:8組卷：17引用：5難度：0.5
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