銅綠假單胞菌常常引起禽類、水貂等發生敗血癥及呼吸系統感染等疾病，給養殖業帶來嚴重損失。科研人員嘗試克隆和表達該菌外膜蛋白oprD基因，以用于后期的疫苗研制工作。相關限制酶識別序列及用于構建基因表達載體的質粒圖示如下，其中Amp“表示氨芐青霉素抗性基因，請回答下列問題：
| 限制酶 | 識別序列 |
| BamHI | 5'G↓GATCC3' |
| EcoRI | 5'G↓A ATTC3' |
| Not I | 5'GC↓GGCCGC3 |
| XhoI | 5'C↓TCGAG3' |
脫氧核苷酸
脫氧核苷酸
，一個質粒分子中通常含 0
0
個游離的磷酸基團。Amp基因常作為基因工程中的標記基因，標記基因的作用是 供重組DNA的鑒定與選擇
供重組DNA的鑒定與選擇
。（2）若已知銅綠假單胞菌的oprD基因序列，可利用
PCR
PCR
技術快速大量擴增該基因。為便于擴增的oprD基因與表達載體的連接，在設計引物時，常在兩條引物的 5′
5′
端加上限制酶的識別序列，設計后的引物如下：引物1：5'-CGGGATCCATGAAAGTGATGAAGTGG-3'；
引物2：5'-CCCTCGAGTTACAGGATCGACAGCGG-3'。
（3）根據上題中的引物信息分析，在構建oprD基因表達載體時，可選擇
BamHⅠ
BamHⅠ
和 XhoⅠ
XhoⅠ
兩種不同的限制酶同時切割目的基因和質粒，以提高目的基因和質粒的重組效率。（4）將目的基因導入大腸桿菌時，一般先用Ca2+溶液處理大腸桿菌，使細胞處于
能吸收周圍DNA分子
能吸收周圍DNA分子
的生理狀態即感受態。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】脫氧核苷酸；0；供重組DNA的鑒定與選擇；PCR；5′；BamHⅠ；XhoⅠ；能吸收周圍DNA分子
【解答】
【點評】
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發布：2024/4/20 14:35:0組卷：19引用：2難度：0.7
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