為探究M基因的功能，科研人員將克隆得到的M基因導入擬南芥植株（自交繁殖），流程如圖所示。回答下列問題：
（1）根據圖中過程a、b,寫出獲得大量M基因的大致方法：以mRNA為模板，利用反轉錄法（逆轉錄法）合成DNA（M基因）片段，再利用PCR技術大量擴增M基因以mRNA為模板，利用反轉錄法（逆轉錄法）合成DNA（M基因）片段，再利用PCR技術大量擴增M基因。
（2）過程d將重組質粒導入農桿菌，通常需要用 Ca2+Ca2+處理農桿菌。過程e在擬南芥植株產生大量花序時，將其花表面部分置于農桿菌懸浮液中浸泡20～30s,3～4周后得到轉化擬南芥植株的種子T0，這就是農桿菌轉化，轉化是指 目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩定和表達的過程目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩定和表達的過程。使用T-DNA介導轉化的原因是 T-DNA能轉移到被侵染的細胞，并整合到該細胞的染色體DNA上T-DNA能轉移到被侵染的細胞，并整合到該細胞的染色體DNA上。
（3）將收獲的擬南芥種子T0播種在含有 卡那霉素卡那霉素的培養基上，能健康生長的幼苗可確定含有M（目的）基因。若采用農桿菌轉化法獲得的擬南芥細胞中只有一條DNA上含有M基因，則要進一步獲得M基因穩定的突變體，下一步操作是 將T0植株連續自交，篩選出能穩定遺傳的突變體將T0植株連續自交，篩選出能穩定遺傳的突變體（選擇最簡便的方法）。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】以mRNA為模板，利用反轉錄法（逆轉錄法）合成DNA（M基因）片段，再利用PCR技術大量擴增M基因；Ca2+；目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩定和表達的過程；T-DNA能轉移到被侵染的細胞，并整合到該細胞的染色體DNA上；卡那霉素；將T0植株連續自交，篩選出能穩定遺傳的突變體
【解答】
【點評】
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發布：2024/4/20 14:35:0組卷：15引用：3難度：0.5
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（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
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