DDX5基因在細胞周期調控、腫瘤發生等方面發揮重要作用。研究人員運用CRISPR-Cas9基因編輯技術對口蹄疫病毒易感的PK-15細胞株中的DDX5基因進行敲除，為后續研究DDX5基因在病毒感染中的作用提供基礎。請據圖回答下列問題。
（1）圖1中，Ori是 解旋酶（解旋酶、DNA聚合酶）解旋酶（解旋酶、DNA聚合酶）（酶）首先結合的核苷酸序列。構建CRISPR-Cas9表達載體時使用的工具酶主要有 限制酶、DNA連接酶限制酶、DNA連接酶。結合對圖2中CRISPR-Cas9技術原理的理解，圖1表達載體中需要插入兩種sgRNA基因，原因是 敲除DDX5基因內部一段堿基時需要有2個切點敲除DDX5基因內部一段堿基時需要有2個切點。
（2）研究中先將CRISPR-Cas9表達載體導入大腸桿菌DH5a,對CRISPR-Cas9表達載體進行擴增。導入后再將菌液利用 （稀釋）涂布平板/平板劃線（稀釋）涂布平板/平板劃線法接種到加有 氨芐青霉素氨芐青霉素的細菌培養基上，待菌落長成后，直接挑取菌落加入到 PCR反應體系/PCR儀PCR反應體系/PCR儀中進行基因鑒定。因細菌DNA是裸露的可以直接作為PCR模板，且PCR變性階段的高溫可直接殺死細菌釋放DNA，故PCR過程中不需要先提取細菌DNA。
（3）取轉化的PK15細胞懸液進行有限稀釋，再接種到96孔細胞培養板上，一段時間后對各孔內的細胞株進行DDX5蛋白檢測，結果如圖3（其中β-actin是真核細胞骨架蛋白）。對細胞懸液進行有限稀釋的目的是 保證每孔中最多接種一個細胞，以獲得單克隆細胞株保證每孔中最多接種一個細胞，以獲得單克隆細胞株，細胞培養時CO2培養箱中充入的氣體應是 95%的空氣和5%CO295%的空氣和5%CO2。根據檢測結果，敲除DDX5基因的細胞株編號有 1和51和5。
【考點】動物細胞培養的條件與過程．
【答案】解旋酶（解旋酶、DNA聚合酶）；限制酶、DNA連接酶；敲除DDX5基因內部一段堿基時需要有2個切點；（稀釋）涂布平板/平板劃線；氨芐青霉素；PCR反應體系/PCR儀；保證每孔中最多接種一個細胞，以獲得單克隆細胞株；95%的空氣和5%CO2；1和5
【解答】
【點評】
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發布：2024/4/20 14:35:0組卷：20引用：1難度：0.4
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1．動物細胞培養和植物組織培養是細胞工程的基本技術，下列關于這兩項技術的敘述，正確的是（ ）
發布：2024/12/31 1:30:1組卷：29引用：2難度：0.7 -
2．回答與基因工程、動物克隆和胚胎工程有關的問題：
（1）幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。在進行基因工程操作時，可以從植物體中提取幾丁質酶的mRNA，以mRNA為材料可以獲得cDNA，其原理是。若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。
（2）為了提高動物成纖維細胞克隆形成率，可以選擇適宜的培養基、添加牛血清、以支持生長等措施。當第一個卡氏瓶中的細胞濃度不再增加時，若要細胞繼續增殖，可采用的方法是。細胞培養過程中，培養箱中通常要維持一定的CO2濃度，CO2的作用是。
（3）下列關于胚胎工程的敘述，錯誤的是
A．在動物的飼料中添加一定量的促性腺激素促使超數排卵
B．若在囊胚期進行胚胎分割，內細胞團均等分割，滋養成則不必
C．可以從雌性動物體內卵泡處吸取卵泡液，取出卵母細胞進一步培養成熟
D．胚胎成纖維細胞可以用于胚胎干細胞的培養，因為其能分泌抑制細胞分化的物質。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：4引用：1難度：0.7 -
3．據國際糖尿病聯盟最新數據，2021年全球約5.37億成人患有糖尿病，670萬成人因糖尿病或其并發癥死亡。如圖是研究人員提出的治療方案，請回答下列問題：
（1）從患者體內獲得體細胞后，對其進行的初次培養稱為，培養的細胞在貼壁生長至鋪滿培養皿底時停止分裂，這種現象稱為。一般來說，動物細胞培養需要的條件有（少答出兩點）。
（2）利用PCR技術擴增正常胰島素基因的前提條件是。目前臨床用的胰島素生效較慢，科學家將胰島素β鏈的第28和29個氨基酸調換順序，成功獲得了速效胰島素。生產速效胰島素，需要對進行定向改造。
A.胰島素
B.胰島素mRNA
C.胰島素基因
D.胰島
（3）欲檢測胰島類似細胞是否具有胰島B細胞的正常生理功能，可設計如下實驗：將等量的胰島類似細胞與正常胰島B細胞分別加入兩組相等濃度的培養液中，適宜且相同條件下進行培養，一段時間后分別檢測兩組培養液中。
（4）該治療糖尿病的方法與異體移植相比，突出的優點是。發布：2024/12/31 2:30:2組卷：35引用：2難度：0.6