趨化因子能吸引免疫細(xì)胞，并刺激它們做出特定免疫反應(yīng)，稱為趨化性反應(yīng)。近日，科學(xué)家人工改造大腸桿菌使其能夠識別癌細(xì)胞表面CD47蛋白，然后利用基因工程將表達(dá)趨化因子CXCL16的基因?qū)刖哂邪邢蚬δ艿拇竽c桿菌中，使其能夠定向轉(zhuǎn)移至腫瘤細(xì)胞并裂解釋放CXCL16招募細(xì)胞毒性T細(xì)胞攻擊腫瘤細(xì)胞，該大腸桿菌菌群被科學(xué)界稱為“細(xì)菌自殺小隊”。目前該方案已在多種小鼠腫瘤模型（如卵巢癌、腸癌等）中起到良好的治療效果。請回答下列問題。

（1）圖中將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌，一般先用

Ca²⁺

Ca²⁺

處理大腸桿菌細(xì)胞。重組質(zhì)粒中啟動子的作用是

供RNA聚合酶識別、結(jié)合，以驅(qū)動目的基因的轉(zhuǎn)錄

供RNA聚合酶識別、結(jié)合，以驅(qū)動目的基因的轉(zhuǎn)錄

。
（2）為防止DNA片段反向拼接和自身環(huán)化，需用限制酶

BamHⅠ、EcoRⅠ

BamHⅠ、EcoRⅠ

同時處理質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA，并用

DNA連接酶

DNA連接酶

進(jìn)行連接。
（3）PCR擴(kuò)增CXCL16基因（5′-CGAGCTCAAGC???GGTCGCCACCA-3′），需在PCR反應(yīng)體系中添加一對序列為5′-CGAGCTCAAGC-3′和

B

B

的引物（請從下列選項中選擇）。
A．5′-GGTCGCCACCA-3′
B．5′-TGGTGGCGACC-3′
C．5′-GCTTGAGCTCG-3′
（4）為確定是否成功培育“細(xì)菌自殺小隊”，研究人員將重組大腸桿菌通過靜脈注射至卵巢癌模型小鼠中，一段時間后若卵巢中

檢測到重組大腸桿菌，且卵巢癌細(xì)胞死亡

檢測到重組大腸桿菌，且卵巢癌細(xì)胞死亡

，而其他健康器官中幾乎未檢測到重組大腸桿菌的存在，則基本能確定培育成功。