淀粉是食物的重要成分，也是一種重要的工業(yè)原料。目前，工廠化水解淀粉需在高溫條件下進行，因此開發(fā)具有自主產(chǎn)權(quán)的耐熱性α–淀粉酶并實現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)，對我國淀粉深加工產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要意義。為了實現(xiàn)α–淀粉酶的高效表達和分泌，我國科研人員以芽孢桿菌構(gòu)建工程菌開展研究。
回答下列問題：
（1）欲從自然界獲得耐高溫的α-淀粉酶，則應(yīng)該到

高溫

高溫

環(huán)境中去尋找。科研人員在上述環(huán)境中的某細菌體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了一種α-淀粉酶AmyS1，經(jīng)科研人員設(shè)計研究，獲得了具有更高的熱穩(wěn)定性和催化效率的a-淀粉酶AmyS2，其研究和生產(chǎn)過程如下：預(yù)期AmyS2功能→設(shè)計目標(biāo)蛋白的三維結(jié)構(gòu)→推測目標(biāo)蛋白的氨基酸序列→人工合成AmyS2基因→將獲得的基因?qū)胙挎邨U菌生產(chǎn)AmyS2，上述過程中涉及到的生物工程技術(shù)有

基因工程（重組DNA技術(shù)）、蛋白質(zhì)工程、發(fā)酵工程（或微生物的培養(yǎng)技術(shù)）

基因工程（重組DNA技術(shù)）、蛋白質(zhì)工程、發(fā)酵工程（或微生物的培養(yǎng)技術(shù)）

（答出3點）。
（2）獲取AmyS2基因后，構(gòu)建基因表達載體的過程如圖1所示。該過程中，將目的基因與原始質(zhì)粒A構(gòu)建成質(zhì)粒B，應(yīng)選擇的限制酶是

NdeI和EcoRI

NdeI和EcoRI

；將質(zhì)粒B與信號肽基因構(gòu)建成質(zhì)粒C，應(yīng)選擇的限制酶是

MluI和Eco52I

MluI和Eco52I

。

（3）信號肽是一段能夠引導(dǎo)目標(biāo)蛋白質(zhì)分泌到細胞外的肽鏈。據(jù)此推測，與質(zhì)粒B相比，在工業(yè)生產(chǎn)中使用導(dǎo)入質(zhì)粒C的工程菌生產(chǎn)α-淀粉酶的優(yōu)勢是

芽孢桿菌可以將α-淀粉酶分泌到細胞外，便于從培養(yǎng)液中提取產(chǎn)物

芽孢桿菌可以將α-淀粉酶分泌到細胞外，便于從培養(yǎng)液中提取產(chǎn)物

。
（4）檢測獲得的重組耐高溫α–淀粉酶的特性，結(jié)果如圖2和圖3所示。在工廠化生產(chǎn)中，利用該酶水解淀粉時，應(yīng)設(shè)置的溫度是

90（或“90-100”）

90（或“90-100”）

℃，理由是

a-淀粉酶在90℃（或“90～100℃“）時相對酶活性和熱穩(wěn)定性均較高

a-淀粉酶在90℃（或“90～100℃“）時相對酶活性和熱穩(wěn)定性均較高

。
溫度/℃