異丁醇具有燃值高、能量密度高等優點，其開發和利用對優化我國能源結構和保護環境有非常重要的戰略意義。基于釀酒酵母的發酵途徑（圖甲）和圖乙的質粒，研究者構建了一種表達載體pUC18，用于過表達ILV2、ILV5、ILV3、AR010基因，以實現異丁醇的大規模生產。已知氨芐青霉素能抑制細菌細胞壁的形成。據此回答下列問題：
（1）圖乙質粒上有多個限制酶切位點，作用是 便于插入多種外源基因便于插入多種外源基因。研究人員先用pUC18轉化經 Ca2+處理Ca2+處理（處理方法）的大腸桿菌，以便篩選、鑒定擴增重組質粒。重組質粒上有 原核生物的復制原點原核生物的復制原點，所以能在大腸桿菌中擴增。
（2）將環狀載體pUC18導入釀酒酵母時，一般會將其進行酶切得到線性化載體，隨后再將其導入受體細胞。根據所學的知識推測酶切得到線性化載體的目的是 線性化載體能整合到釀酒酵母染色體DNA，從而能更穩定存在并發揮功能線性化載體能整合到釀酒酵母染色體DNA，從而能更穩定存在并發揮功能。
（3）提取成功構建的表達載體并導入不能合成組氨酸的釀酒酵母菌株，將菌株接種在培養基中以獲得單菌落，該過程稱為微生物的 選擇選擇培養。培養基中需要添加的物質有 cc。
（用下列字母填寫：a.組氨酸、b.氨芐青霉素、c瓊脂）。
（4）異丁醇的大量積累會傷害細胞，研究人員給該工程菌導入一個經改造的光敏蛋白基因，使工程菌對特定的藍光敏感。進行不同的光照處理，使其在異丁酵產生階段和生長繁殖階段進行切換，結果如下圖丙所示。
注：5/10/20h pulse分別代表在黑暗條件下每隔5、10、20h發出15s和65s的藍光脈沖30min
①對照組的酵母菌需要導入 不含光敏蛋白基因的空載體不含光敏蛋白基因的空載體。
②以葡萄糖為碳源，利用該轉基因釀酒酵母進行發酵時，若想進一步提高其異丁醇產量，
綜合圖甲和圖乙信息，分別寫出進一步優化菌株和工藝的措施（各一點） 敲除該工程菌的ADHs和ALDs基因，在黑暗條件下每隔10h發出15s和65s的藍光脈沖30min敲除該工程菌的ADHs和ALDs基因，在黑暗條件下每隔10h發出15s和65s的藍光脈沖30min。
【答案】便于插入多種外源基因；Ca2+處理；原核生物的復制原點；線性化載體能整合到釀酒酵母染色體DNA，從而能更穩定存在并發揮功能；選擇；c；不含光敏蛋白基因的空載體；敲除該工程菌的ADHs和ALDs基因，在黑暗條件下每隔10h發出15s和65s的藍光脈沖30min
【解答】
【點評】
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發布：2024/4/20 14:35:0組卷：10引用：1難度：0.6
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6