Lon1蛋白酶具有降解葉綠體和線粒體內氧化蛋白、維持細胞正常代謝的功能。為揭示控制Lon1蛋白酶表達的藍莓VcLon1基因的生物學功能，并為其他植物抗旱機制研究提供基礎信息。科研工作者通過獲得轉基因本氏煙植株來進行干旱生理分析。回答下列問題：
（1）為獲得VcLon1基因，科研人員用藍莓基因組DNA為模版，根據 VcLon1 基因的核苷酸序列VcLon1 基因的核苷酸序列設計引物進行PCR擴增。PCR擴增的原理是 DNA的復制DNA的復制。在進行①過程時，選用兩種酶同時切割是為了防止一種酶切割時造成 目的基因與載體反向連接/自身連接目的基因與載體反向連接/自身連接。
（2）在進行③過程時，需要用酒精溶液和 次氯酸鈉（或氯化汞）次氯酸鈉（或氯化汞）溶液進行消毒，最后使用無菌水清洗。在④過程中使用的培養基中需加入一定量的蔗糖，作用是 提供碳源，維持培養基的滲透壓提供碳源，維持培養基的滲透壓（答出2點即可）。
（3）在⑤過程中，將本氏煙細胞與農桿菌混合后共培養，旨在讓目的基因進入本氏煙細胞，影響該過程成功的因素，除溫度等環境因素外，還可能是 共培養時間；農桿菌的種類和活性等；受體細胞的生理狀態等共培養時間；農桿菌的種類和活性等；受體細胞的生理狀態等（答出2點即可）。除了本實驗采用的方法，還可采用 電擊法、基因槍法、花粉管通道法等電擊法、基因槍法、花粉管通道法等法將VcLon1基因導入植物受體細胞。
（4）在⑦過程中，試管苗需要移栽至適宜的光照和溫度下，并逐漸 降低降低濕度進行適應鍛煉后方可移栽至自然環境中種植。
（5）科研人員經過檢測發現在轉基因煙草植株1-10中 33號植株未成功導入外源基因VcLon1，而WT植株則不能擴增出2982bp條帶。隨后利用了半定量PCR分析外源基因VcLon1在本氏煙中的表達，其結果如圖2，因此后續可取 1、2、4、6-91、2、4、6-9號轉基因本氏煙植株作為干旱生理分析的試驗材料。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】VcLon1 基因的核苷酸序列；DNA的復制；目的基因與載體反向連接/自身連接；次氯酸鈉（或氯化汞）；提供碳源，維持培養基的滲透壓；共培養時間；農桿菌的種類和活性等；受體細胞的生理狀態等；電擊法、基因槍法、花粉管通道法等；降低；3；1、2、4、6-9
【解答】
【點評】
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發布：2024/9/28 1:0:2組卷：5引用：1難度：0.5
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（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
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（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
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