菊花是兩性花，LFY是控制花分生組織形成的基因，LFY 基因過量表達會使植物開花提前。為使菊花花期提前，科研人員利用過表達的擬南芥LFY基因制備轉基因菊花，重組Ti質粒的部分信息及實驗流程如圖1所示。啟動子均為真核生物啟動子。回答下列問題：
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重組Ti質粒導入農桿菌后，利用農桿菌轉化法轉化并篩選LFY轉基因菊花。
（1）本實驗中潮霉素的作用是篩選 轉入LFY基因的菊花細胞轉入LFY基因的菊花細胞。步驟①的培養一般 不需要不需要 （填“需要“或“不需要”）光照。圖中Ⅰ中應填 愈傷組織愈傷組織。
（2）調整步驟②和步驟③培養基中 生長素和細胞分裂素生長素和細胞分裂素的濃度和比例可誘導菊花芽或根的形成。
（3）以 菊花染色體DNA菊花染色體DNA為模板，選用LFY基因特異性引物，用PCR檢測LFY基因是否導入菊花細胞中。用 抗原-抗體雜交抗原-抗體雜交方法檢測轉基因菊花中LFY蛋白的表達水平，進一步篩選轉基因菊花.
（4）為避免該LFY轉基因菊花中潮霉素抗性基因帶來潛在的環境問題，可以優化實驗方案，利用攜帶雙T-DNA的Ti質粒（圖2）制備轉基因菊花。已知當Ti質粒存在雙T-DNA時，兩個T-DNA可以獨立整合進植物細胞染色體DNA中。設計一個轉基因植物制備和雜交育種相結合的實驗方法，篩選只表達FLY的轉基因菊花 將LFY基因和潮霉素抗性基因分別克隆到Ti質粒的兩個T-DNA上，構建重組Ti質粒；利用農桿菌轉化法轉化并篩選同時表達LFY基因和潮霉素抗性基因的菊花；將轉基因菊花自交，在子代中篩選出只表達FLY的轉基因菊花將LFY基因和潮霉素抗性基因分別克隆到Ti質粒的兩個T-DNA上，構建重組Ti質粒；利用農桿菌轉化法轉化并篩選同時表達LFY基因和潮霉素抗性基因的菊花；將轉基因菊花自交，在子代中篩選出只表達FLY的轉基因菊花。（ 簡要寫出實驗思路即可）
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】轉入LFY基因的菊花細胞；不需要；愈傷組織；生長素和細胞分裂素；菊花染色體DNA；抗原-抗體雜交；將LFY基因和潮霉素抗性基因分別克隆到Ti質粒的兩個T-DNA上，構建重組Ti質粒；利用農桿菌轉化法轉化并篩選同時表達LFY基因和潮霉素抗性基因的菊花；將轉基因菊花自交，在子代中篩選出只表達FLY的轉基因菊花
【解答】
【點評】
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發布：2024/8/6 8:0:9組卷：7引用：2難度：0.6
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6