血管內皮生長因子（VEGF）是在腫瘤細胞中通過表達，分泌到血液中的蛋白質類生長因子，促進腫瘤血管的生成，進而為腫瘤組織生長提供足夠的氧氣和營養物質。研究人員利用pVAX1質粒和VEGF基因構建了pVAX1-VEGF的DNA疫苗，為腫瘤免疫治療奠定基礎。回答下列問題：
（1）首先從人的肺癌細胞株A549中提取mRNA，通過 反轉錄法反轉錄法獲得VEGF基因。
（2）對獲取的VEGF基因進行PCR擴增前，需要根據VEGF基因序列設計兩種引物，而不是一種引物，其原因是 基因的兩條反向平行的鏈都做模板，其堿基序列不同基因的兩條反向平行的鏈都做模板，其堿基序列不同。為便于VEGF基因與質粒pVAX連接，需要在引物的 5'5'端加上相關限制酶的酶切位點。擴增時，每個循環一般要經歷“變性、復性、延伸”三個過程，其中 復性復性溫度過高，則引物無法與 DNA模板DNA模板結合，
可能導致PCR反應得不到任何擴增產物。
（3）構建的pVAX1-VEGF上應含有特定的 啟動子啟動子（填“復制原點”“啟動子”或“標記基因”），它能被受體細胞的 RNA聚合酶RNA聚合酶所識別，以便于驅動基因的轉錄。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】反轉錄法；基因的兩條反向平行的鏈都做模板，其堿基序列不同；5'；復性；DNA模板；啟動子；RNA聚合酶
【解答】
【點評】
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發布：2024/4/20 14:35:0組卷：6引用：1難度：0.7
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1．數字PCR技術是一種核酸分子絕對定量技術，其原理如圖所示。下列有關敘述正確的是（ ）
發布：2024/12/30 23:30:2組卷：7引用：2難度：0.6 -
2．科學家為了提高光合作用過程中Rubiaco酶對CO2的親和力，利用PCR定點突變技術改造Rubisco酶基因，從而顯著提高了植物的光合作用速率。請回答下列問題：
（1）PCR定點突變技術屬于（填“基因工程”或“蛋白質工程”）。可利用定點突變的DNA構建基因表達載體，常用將基因表達載體導入植物細胞，還需用到植物細胞工程中的技術，才能最終獲得轉基因植物。
（2）PCR過程所依據的原理是。利用PCR技術擴增，若將一個目的基因復制10次，則需要在緩沖液中至少加入個引物。
（3）目的基因進入受體細胞內，并在受體細胞內維持穩定和表達的過程稱為。科研人員通過實驗研究發現培育的該轉基因植株的光合作用速率并未明顯增大，可能的原因是。
（4）另有一些科學家利用生物技術將人的生長激素基因導入小鼠受精卵的細胞核中，經培育獲得一種轉基因小鼠，其膀胱上皮細胞可以合成人的生長激素并分泌到尿液中。有關敘述錯誤的是。
A．選擇受精卵作為外源基因的受體細胞是因為這種細胞的全能性最容易表達
B．采用DNA分子雜交技術可檢測外源基因在小鼠細胞內是否成功表達
C．人的生長激素基因能在小鼠細胞表達，說明遺傳密碼在不同種生物中可以通用
D．將轉基因小鼠體細胞進行核移植（克隆），可以獲得多個具有外源基因的后代發布：2025/1/16 8:0:1組卷：14引用：2難度：0.6 -
3．下列關于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ）
發布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7