番木瓜極易受環斑病毒（PRSV，單鏈RNA病毒）侵襲。上世紀番木瓜環斑病在我國爆發，導致番木瓜嚴重減產。2006年，轉基因番木瓜獲得農業部頒發的安全證書，這是我國第一例獲準進行商品化種植的轉基因果樹。
（1）最初的轉基因番木瓜品種“Rainbow”是以PRSV的衣殼蛋白（CP）基因作為目的基因。通過

逆轉錄和PCR/RTPCR/逆轉錄

逆轉錄和PCR/RTPCR/逆轉錄

過程從PRSV基因組中獲取CP基因，經限制酶和

DNA連接

DNA連接

酶處理，構建基因表達載體，用

花粉管通道/農桿菌轉化/基因槍

花粉管通道/農桿菌轉化/基因槍

法導入番木瓜愈傷組織中，培養獲得轉基因番木瓜植株。
（2）病毒自身基因作為番木瓜抗性基因的機理源于一種名為RNAi的基因沉默機制（圖1）。轉入番木瓜細胞內的CP基因轉錄出CP mRNA。PRSV侵染番木瓜后，病毒RNA會與CP mRNA通過

堿基互補配對

堿基互補配對

原則結合形成雙鏈RNA。D酶與該雙鏈RNA結合，經復雜過程形成RISC復合物，最終阻礙病毒RNA在宿主細胞內進行

RNA復制和指導蛋白質合成

RNA復制和指導蛋白質合成

，進而抑制病毒增殖，體現抗病性。
（3）“Rainbow”對夏威夷的PRSV（HA株系）具有良好的抗性，但對我國的PRSV（YS等株系）抗性不強。中國科學家以PRSV的RNA復制酶基因（RP）為目的基因，成功培育出具有廣譜抗性的“華農1號”抗病毒番木瓜新品種。請推測“Rainbow”對我國PRSV抗性不強而“華農1號”具有廣譜抗性的原因

不同株系間CP基因序列差異較大導致Rainbow對我國PRSV抗性不強。PSRV的RP基因序列可能比CP基因更加保守（不同株系的RP基因序列相同），作為目的基因導入番木瓜后，具有廣泛的病毒株系抗性

不同株系間CP基因序列差異較大導致Rainbow對我國PRSV抗性不強。PSRV的RP基因序列可能比CP基因更加保守（不同株系的RP基因序列相同），作為目的基因導入番木瓜后，具有廣泛的病毒株系抗性

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（4）上述轉基因番木瓜對PRSV的抗性僅有20%。為使番木瓜具有更高效的抗PRSV能力，我國科研人員設計引物向RP基因兩端引入兩個酶切位點，并和中間載體1連接構建中間載體2，利用同樣的方法構建出中間載體3（圖2）。最后用限制酶將融合基因從中間載體3上切下，構建表達載體，導入番木瓜中。

請在圖2的①、②、③處寫出恰當的限制酶

BglⅡ、SalⅠ、BamHⅠ

BglⅡ、SalⅠ、BamHⅠ

。結合圖1、圖2闡述利用該過程構建的轉基因番木瓜比直接導入RP基因的轉基因番木瓜抗病毒效果更好的機理

融合基因中兩段RP基因轉錄出的RNA互補配對，mRNA內部形成雙鏈結構，誘導RNA沉默機制啟動（融合基因中正向連接的RP基因轉錄出的mRNA和反向連接的RP基因轉錄出的mRNA互補配對，形成雙鏈結構，誘導RNA沉默機制啟動）

融合基因中兩段RP基因轉錄出的RNA互補配對，mRNA內部形成雙鏈結構，誘導RNA沉默機制啟動（融合基因中正向連接的RP基因轉錄出的mRNA和反向連接的RP基因轉錄出的mRNA互補配對，形成雙鏈結構，誘導RNA沉默機制啟動）

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