白僵菌可感染農業害蟲，常作為防治害蟲的菌劑。由于白僵菌對除草劑草丁膦敏感且殺死害蟲的能力較弱，科研人員對其進行基因工程改造，流程如圖所示。
（1）蘇云金芽孢桿菌產生的毒蛋白，能有效殺死害蟲。已知該基因的全部序列，科研人員通過人工合成人工合成法和PCR技術獲得大量毒蛋白基因片段。據圖分析，將毒蛋白基因和質粒連接獲得重組質粒1的過程需要用到的工具酶是NcoI、BamHINcoI、BamHI和DNA連接酶。
（2）重組質粒1和Bar基因（草丁膦抗性基因）各自用XbaI酶處理，得到酶切片段。重組質粒1的酶切片段再用去磷酸化酶處理，使末端游離的磷酸基團脫離，目的是防止重組質粒1酶切片段自身連接重組質粒1酶切片段自身連接。將未用去磷酸化酶處理的Bar基因與重組質粒1連接，獲得重組質粒2．獲得的重組質粒2的是圖中的CC。
（3）將重組質粒2與經Ca2+Ca2+處理過的白僵菌菌液混合進行轉化，重組質粒2在白僵菌細胞內被修復。一段時間后用含有草丁膦草丁膦的平板培養基進行篩選，獲得含有Bar基因的重組白僵菌。
（4）提取上述重組白僵菌全部mRNA，加入逆轉錄逆轉錄酶，獲得cDNA．在獲得的產物中加入毒蛋白基因引物進行PCR反應，用以檢測毒蛋白基因是否完成了轉錄轉錄。
（5）科研人員將重組白僵菌噴涂于植物葉片上，以此飼喂饑餓處理的害蟲，記錄單位時間內的死亡害蟲數死亡害蟲數，以判斷重組白僵菌的殺蟲效果。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】人工合成；NcoI、BamHI；重組質粒1酶切片段自身連接；C；Ca2+；草丁膦；逆轉錄；轉錄；死亡害蟲數
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：5引用：3難度：0.6
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