目前基因工程所用的質粒載體主要是以天然細菌質粒的各種元件為基礎重新組建的人工質粒，pBR322質粒是較早構建的質粒載體，其主要結構如圖所示。
（1）構建人工質粒時要有抗性基因，以便于 篩選（鑒別）目的基因是否導入受體細胞篩選（鑒別）目的基因是否導入受體細胞。
（2）pBR322分子中有單個EcoRⅠ限制酶作用位點，EcoRⅠ只能識別序列—GAATTC—，并只能在G和A之間切割。若在某目的基因的兩側各有1個EcoRⅠ的切點，請畫出目的基因兩側被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端：
。
（3）pBR322分子中另有單個的BamHⅠ限制酶作用位點，現將經BamHⅠ處理后的質粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因，通過DNA連接酶作用恢復 磷酸二酯磷酸二酯鍵，成功獲得了重組質粒的原因是 兩種限制酶（BamHⅠ和BglⅡ）切割得到的黏性末端相同兩種限制酶（BamHⅠ和BglⅡ）切割得到的黏性末端相同。
（4）為了檢測上述重組質粒是否導入原本無Ampr和Tetr的大腸桿菌，將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養基上培養，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環素的培養基上培養，得到如圖三的結果（空圈表示與圖二對照無菌落的位置）。與圖三空圈相對應的圖二中的菌落表現型是 能抗氨芐青霉素，但不能抗四環素能抗氨芐青霉素，但不能抗四環素，圖三結果顯示，多數大腸桿菌導入的是 pBR322質粒pBR322質粒。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】篩選（鑒別）目的基因是否導入受體細胞；；磷酸二酯；兩種限制酶（BamHⅠ和BglⅡ）切割得到的黏性末端相同；能抗氨芐青霉素，但不能抗四環素；pBR322質粒
；磷酸二酯；兩種限制酶（BamHⅠ和BglⅡ）切割得到的黏性末端相同；能抗氨芐青霉素，但不能抗四環素；pBR322質粒【解答】
【點評】
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