科學(xué)家研究嗜熱土壤芽孢桿菌得出這種桿菌能產(chǎn)生β葡萄糖苷酶（BglB），這是一種耐熱纖維素酶，為了在工業(yè)生產(chǎn)中更好地應(yīng)用，開展了以下試驗(yàn)，依題回答下列問題。
Ⅰ.利用大腸桿菌表達(dá)BglB酶
（1）PCR擴(kuò)增BglB基因時(shí)，需要的條件有 目的基因、四種游離的脫氧核苷酸、引物、耐高溫的DNA聚合酶目的基因、四種游離的脫氧核苷酸、引物、耐高溫的DNA聚合酶（至少答3點(diǎn)）。
（2）如圖1為質(zhì)粒限制酶切圖譜。BglB基因不含圖中限制酶識(shí)別序列。為使PCR擴(kuò)增的BglB基因重組進(jìn)該質(zhì)粒，擴(kuò)增的BglB基因兩端需分別引入 NdeINdeI和 BamHIBamHI限制酶的識(shí)別序列。
（3）大腸桿菌不能降解纖維素，原因是 不能產(chǎn)生分解纖維素的有關(guān)酶不能產(chǎn)生分解纖維素的有關(guān)酶，但轉(zhuǎn)入上述構(gòu)建好的表達(dá)載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因?yàn)?轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌合成出有活性的BglB酶轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌合成出有活性的BglB酶。
Ⅱ.溫度對(duì)BglB酶活性的影響
（4）據(jù)圖2、3可知，80℃保溫時(shí)間達(dá)到 3030分鐘后，BglB酶會(huì)失活；為高效利用BglB酶降解纖維素，反應(yīng)溫度最好控制在 BB（單選）。
A．50℃
B．60℃
C．70℃
D．80℃
注：酶的熱穩(wěn)定性是酶在一定溫度下，保溫一段時(shí)間后通過其活性的保持程度來反映的
Ⅲ.鑒定篩選出的大腸桿菌菌落中是否含有正確插入目的基因的重組質(zhì)粒
（5）為鑒定篩選出的大腸桿菌菌落中是否含有正確插入目的基因的重組質(zhì)粒，擬設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR鑒定。圖4所示甲、乙、丙3條引物在正確重組質(zhì)粒中相應(yīng)位置，PCR鑒定時(shí)應(yīng)選擇的一對(duì)引物是 乙和丙乙和丙。某學(xué)生嘗試用圖中另外一對(duì)引物，結(jié)果從某一菌落的質(zhì)粒中擴(kuò)增了400bp片段，原因是 目的基因反向連接目的基因反向連接。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】目的基因、四種游離的脫氧核苷酸、引物、耐高溫的DNA聚合酶；NdeI；BamHI；不能產(chǎn)生分解纖維素的有關(guān)酶；轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌合成出有活性的BglB酶；30；B；乙和丙；目的基因反向連接
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/7/8 8:0:10組卷：2引用：2難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6