金屬硫蛋白（MT）是一類廣泛存在于動植物中具有金屬結合能力的蛋白質，決定該蛋白質合成的基因結構如圖1所示，其中A鏈為編碼鏈、B鏈為模板鏈。科研人員利用圖2所示質粒構建棗樹的MT基因重組DNA分子并導入大腸桿菌細胞，獲得對重金屬鎘（Cd）具有吸附能力和耐受能力的MT工程菌。回答下列問題：
（注：XhoⅠ、KpnⅠ、PstⅠ為不同限制酶的識別位點：LacZ基因編碼產生的β-半乳糖苷酶可以催化無色物質X-gal產生藍色物質使菌落呈現藍色，否則菌落為白色：amp基因為氨芐青霉素抗性基因。）
（1）獲取目的基因提取棗樹細胞的 mRNAmRNA，經逆轉錄獲得cDNA：為了使PCR擴增后的產物按照正確的方向與已被酶切的載體連接，克隆MT基因時應選擇的引物組合是 引物Ⅱ和引物Ⅲ引物Ⅱ和引物Ⅲ，并在其 5'5'（填“5′或3′”）末端分別添加限制酶 KpnI和XhoIKpnI和XhoI的識別序列。
（2）構建重組DNA分子啟動子是 RNA聚合酶RNA聚合酶識別并結合的部位：基因工程中構建用于原核生物的表達載體時，常用的啟動子不包括以下哪一項？DD。（A、噬菌體基因啟動子B、乳酸菌基因啟動子C、大腸桿菌基因啟動子D、棗樹MT基因啟動子）
（3）導入、篩選和鑒定MT工程菌。
①將得到的混合物導入到用 Ca2+Ca2+處理的大腸桿菌完成 轉化轉化實驗。
②將菌液稀釋并涂布在含X-gal和氨芐青霉素的培養基上進行培養后，隨機挑取 白色白色的單菌落可獲得MT工程菌。
③欲進一步對MT工程菌進行鑒定，可將挑取出的MT工程菌與 普通大腸桿菌普通大腸桿菌分別接種至含 （一定濃度的重金屬）鎘（一定濃度的重金屬）鎘的LB液體培養基中，置于恒溫培養箱中培養，適宜時間后檢測菌種數量。
（4）擴大菌種將MT工程菌接種至發酵罐內進行擴增，培養過程中可定期取樣并使用細菌計數板對 菌體菌體（填“菌體”或“菌落”）進行直接計數，以評估增殖情況。發酵結束后，采用 過濾、沉淀過濾、沉淀等方法獲得所需的發酵產品。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】mRNA；引物Ⅱ和引物Ⅲ；5'；KpnI和XhoI；RNA聚合酶；D；Ca2+；轉化；白色；普通大腸桿菌；（一定濃度的重金屬）鎘；菌體；過濾、沉淀
【解答】
【點評】
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