我國是棉花的生產(chǎn)和消費(fèi)大國，棉花在種植過程中，常常會受到一些蟲害的侵襲，其中以棉鈴蟲最為常見，它可以使棉花產(chǎn)量減少三分之一，甚至絕收。科研小組利用基因工程技術(shù)將“殺蟲基因”轉(zhuǎn)入棉花細(xì)胞成功培育出抗蟲棉，該技術(shù)所用的質(zhì)粒與含“殺蟲基因”的DNA上相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)分別如圖1、圖2所示（不同限制酶的識別序列和酶切位點(diǎn)：BAmHⅠ5′--G↓GATCC--3′，BclⅠ5′--T↓GATCA--3′，SAu3AⅠ5′--↓GATC--3′，HindⅢ5′--A↓AGCTT--3′）。請分析并回答下列問題：

（1）構(gòu)建基因表達(dá)載體是培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的核心工作，目的是

保證目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并且遺傳給下一代并表達(dá)和發(fā)揮作用

保證目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并且遺傳給下一代并表達(dá)和發(fā)揮作用

。一個完整的基因表達(dá)載體包括

目的基因、復(fù)制原點(diǎn)、啟動子、終止子、標(biāo)記基因

目的基因、復(fù)制原點(diǎn)、啟動子、終止子、標(biāo)記基因

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（2）用圖中“殺蟲基因”為目的基因和質(zhì)粒構(gòu)建抗蟲棉基因表達(dá)載體時，科研人員分別使用HindⅢ和SAu3AⅠ兩種限制酶處理含目的基因的DNA片段，用HindⅢ和BAmHⅠ兩種限制酶處理質(zhì)粒，原因是

避免自身環(huán)化和反向連接，保證目的基因正向插入質(zhì)粒中，防止質(zhì)粒BclI位點(diǎn)被切斷

避免自身環(huán)化和反向連接，保證目的基因正向插入質(zhì)粒中，防止質(zhì)粒BclI位點(diǎn)被切斷

。限制酶切斷的是DNA分子中特定部位的兩個脫氧核苷酸之間的

磷酸二酯鍵

磷酸二酯鍵

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（3）將上述切開的質(zhì)粒與目的基因混合，加入DNA連接酶連接后，利用

花粉管通道法

花粉管通道法

方法導(dǎo)入受體細(xì)胞，得到的受體細(xì)胞的類型（對兩種抗生素X和Y表現(xiàn)出抗性R或非抗性S）包含

①②④

①②④

（不考慮基因突變）。（①X^RY^R ②X^RY^S ③X^SY^R ④X^SY^S）
（4）目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后是否穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性，應(yīng)用

抗原-抗體雜交法

抗原-抗體雜交法

的方法檢測目的基因是否表達(dá)出相應(yīng)蛋白以及還需要進(jìn)行個體生物學(xué)水平的鑒定。“殺蟲基因”表達(dá)產(chǎn)生的Bt抗蟲蛋白被分解為多肽后與棉鈴蟲腸上皮細(xì)胞的特異性受體結(jié)合導(dǎo)致細(xì)胞膜穿孔，破壞棉鈴蟲的消化系統(tǒng)來殺死棉鈴蟲。若牲畜誤食抗蟲棉腸道無明顯受損，可能原因是

牲畜的胃液呈酸性，腸道細(xì)胞也沒有特異性受體

牲畜的胃液呈酸性，腸道細(xì)胞也沒有特異性受體

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