圖1是某基因工程中構建重組質粒的過程示意圖，載體質粒P0具有四環素抗性基因（tel′）和氨芐青霉素抗性基因（amp′）。請回答下列問題：
（1）EcoRⅤ酶切位點為
，EcoRⅤ酶切出來的線性載體P1為 平平末端。
（2）用耐高溫的DNA聚合酶進行PCR擴增獲得的目的基因片段，其兩端各自帶有一個腺嘌呤脫氧核苷酸。載體P1用酶處理，在兩端各添加了一個堿基為 胸腺嘧啶（T）胸腺嘧啶（T）的脫氧核苷酸，形成P2；P2和目的基因片段在 DNA連接DNA連接酶作用下，形成重組質粒P3。
（3）篩選含有重組質粒P3的菌落首先在含 氨芐青霉素氨芐青霉素的培養基上進行。
（4）為鑒定篩選出的菌落中是否含有正確插入目的基因的重組質粒，擬設計引物進行PCR鑒定。圖2所示為甲、乙、丙3條引物在正確重組質粒中的相應位置，PCR鑒定時應選擇的一對引物是 乙、丙乙、丙。某學生嘗試用圖中另外一對引物，從某一菌落的質粒中擴增出了400bp的片段，原因是 目的基因反向連接目的基因反向連接。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】平；胸腺嘧啶（T）；DNA連接；氨芐青霉素；乙、丙；目的基因反向連接
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/11 8:0:9組卷：20引用：1難度：0.6
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
發布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ）
發布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6