CRISPR/Cas9是一種高效的基因編輯技術，Cas9基因表達的Cas9蛋白像一把“分子剪刀”，在單鏈向導RNA（SgRNA）引導下，切割DNA雙鏈以敲除目標基因或插入新的基因。CRISPR/Cas9基因編輯技術的工作原理如圖所示。
回答下列問題。
（1）過程①中，為構建CRISPR/Cas9重組質粒，需對含有特定sgRNA編碼序列的DNA進行酶切處理后，將其插入到經相同酶切處理過的質粒上，插入時所需要的酶是 DNA連接酶DNA連接酶，切合和插入所用的限制酶種類一般應相同，原因是 為了便于質粒和目的基因連接為了便于質粒和目的基因連接。
（2）過程②中，將重組質粒導入大腸桿菌細胞的方法是 感受態細胞法/Ca2+處理法感受態細胞法/Ca2+處理法。
（3）過程③～⑤中，SgRNA與Cas9蛋白形成復合體，該復合體中的SgRNA可識別并與目標DNA序列特異性結合，二者結合的原理是 堿基互補配對堿基互補配對。隨后，Cas9蛋白可切割 目標基因目標基因序列。
（4）利用CRISPR/Cas9基因編輯技術敲除某DNA片段（記為甲）中長度為1200bp的基因（記為乙），在DNA水平上判斷基因敲除是否成功所采用的方法是 DNA分子雜交DNA分子雜交，大致過程及成功敲除的判斷依據是 用乙制作的探針與甲雜交，若無雜交帶，則敲除成功用乙制作的探針與甲雜交，若無雜交帶，則敲除成功。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】DNA連接酶；為了便于質粒和目的基因連接；感受態細胞法/Ca2+處理法；堿基互補配對；目標基因；DNA分子雜交；用乙制作的探針與甲雜交，若無雜交帶，則敲除成功
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：5引用：1難度：0.5
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
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發布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6