自然界中某些細菌可通過代謝將原油轉化為穩定無害的終產物，科學家為獲得能有效修復原油污染土壤的工程菌展開相關研究。
（1）獲得能降解原油的目標菌可從原油污染土壤原油污染土壤取樣，樣品經無菌水無菌水（無菌水/蒸餾水）稀釋后涂布于以原油為唯一碳源的固體培養基上培養，分離純化后獲得目標菌A。
（2）目標菌A成膜性差，不能有效控制原油向深層土壤滲透。研究人員將假單胞菌的bdlA基因（約1300bp）導入目標菌A體內，嘗試構建成膜性好的工程菌。
①假單胞菌遭受環境壓力時，會分泌大量胞外復合物將自身包裹于其中形成細菌聚集膜樣物（生物被膜），體現了生物對環境的適應適應。
②圖1為bdlA基因與pX系列質粒連接構建的重組質粒模式圖，為初步檢測構建是否成功，可選用限制酶Csp45I、XbaICsp45I、XbaI對其切割，并對酶切產物及重組質粒進行凝膠電泳檢測，結果如圖2。據圖2可初步判斷重組質粒構建成功，依據是連接到兩個質粒上的目的基因一致連接到兩個質粒上的目的基因一致。
（3）上述方法獲得的兩種工程菌命名為KT2和KT5，在不同時間測定實驗組中工程菌及對照組中導入普通質粒的目標菌A導入普通質粒的目標菌A的生物被膜總量相對值，結果如圖3所示。該結果表明在36t/h時KT2和KT5兩種工程菌的生物被膜量相對值顯著提高在36t/h時KT2和KT5兩種工程菌的生物被膜量相對值顯著提高。
（4）若要將以上工程菌用于原油污染土壤的修復，舉一例說明下一步還應進行哪些方面的研究如何擴大培養如何擴大培養？
【考點】基因工程的基本操作程序．
【答案】原油污染土壤；無菌水；適應；Csp45I、XbaI；連接到兩個質粒上的目的基因一致；導入普通質粒的目標菌A；在36t/h時KT2和KT5兩種工程菌的生物被膜量相對值顯著提高；如何擴大培養
【解答】
【點評】
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發布：2024/4/20 14:35:0組卷：36引用：2難度：0.6
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1．胚胎干細胞（ES細胞）介導法的主要操作過程是：將外源基因導入胚胎干細胞，然后將轉基因的胚胎干細胞注射于受體動物胚胎后可參與受體的胚胎構成。如圖是利用胚胎干細胞介導法培育出熒光小鼠的過程。回答下列問題：
（1）從水母中獲取綠色熒光蛋白基因有多種方法。將水母的全部基因用限制性內切核酸酶切成片段，插入到載體分子中，并將所得的轉入大腸桿菌進行克隆保存，這些大腸桿菌的群體稱為。
（2）②過程中用到了酶和酶，③過程常用方法，⑥過程通常要對受體母鼠進行處理后才可進行胚胎移植。
（3）關于受體母鼠妊娠產下的子代小鼠的特點，下列敘述正確的是。
A.各細胞都有綠色熒光蛋白基因，所以全身每個細胞都有綠色熒光蛋白產生
B.各細胞都有綠色熒光蛋白基因，但只有部分細胞有綠色熒光蛋白產生
C.不是所有細胞都有綠色熒光蛋白基因，所以只有部分細胞有綠色熒光蛋白產生
D.該小鼠產生的配子中含綠色熒光蛋白基因的概率為12發布：2024/6/27 10:35:59組卷：4引用：1難度：0.7 -
2．p53基因是一種抑癌基因，在惡性腫瘤患者中突變率達50%以上。與人相比，大象體內含有多對p53基因，推測是其很少患腫瘤的主要原因。設計實驗探究人p53基因在乳腺腫瘤細胞中的作用，回答下列問題：
（1）利用PCR技術擴增p53基因。首先根據p53基因的核苷酸序列，設計并合成，其能與變性p53基因單鏈結合，在催化作用下延伸，如此循環多次。
（2）p53基因表達載體的構建。如圖所示，表達載體上除了標注的DNA片段外，在p53基因上游還必須擁有的DNA片段（箭頭所示）是，其作用機理是。外源p53基因插入載體中至少需要兩種工具酶，包括準確切割DNA的限制性核酸內切酶和將雙鏈DNA片段“縫合”起來的。
（3）乳腺腫瘤細胞培養。完成倫理學審查和病人知情同意書簽署后，將患者乳腺腫瘤組織塊剪碎，制成細胞懸液在適宜的條件下培養。培養環境中所需的主要氣體包括細胞代謝必需的和維持培養液pH值的。保持培養環境處于無菌無毒條件的操作包括（答出兩點即可）。
（4）檢測p53基因表達對乳腺腫瘤細胞增殖的影響。分別將空載體和p53表達載體轉入腫瘤細胞培養，采用特殊方法檢測細胞增殖情況，并從培養的腫瘤細胞中提取蛋白質，用相應的進行雜交，檢測p53基因翻譯成蛋白質的情況，探索雜交帶強度與細胞增殖率相關性。發布：2024/4/20 14:35:0組卷：58引用：5難度：0.6
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