環介導恒溫擴增技術（LAMP），因操作簡便，能快速、精確地進行基因擴增而得到廣泛的應用。LAMP使用的酶是有鏈置換效應的Bst DNA聚合酶，其原理如圖1所示，請回答下列問題：
（1）LAMP技術溫度控制在63℃左右，與常規PCR相比，其簡化之處是不需要 變性、復性、延伸過程的循環（或溫度循環）變性、復性、延伸過程的循環（或溫度循環）；另一個簡化之處是通過肉眼觀察有無白色沉淀焦磷酸鎂即可判斷靶基因是否復制，推測其中的焦磷酸來自 dNTPdNTP水解。
（2）如圖1，針對靶基因上的6個區域設計了4條引物，其中決定主要產物長度的是 2條內部引物（或FIP、BIP）2條內部引物（或FIP、BIP），由引物F3延伸出子鏈的作用是 促進鏈置換，增加模板數量促進鏈置換，增加模板數量。部分單鏈DNA兩端成環狀，環狀結構中局部雙鏈的形成依賴 堿基互補配對堿基互補配對原則。
（3）將LAMP技術用于獼猴桃褪綠環斑相關病毒（AcCRaV）的核酸檢測，為找到最適宜的靶序列擴增溫度，研究者設定56-63℃溫度梯度，并進行染色、電泳等操作后，得到如圖2實驗結果。據圖可知，此靶序列最佳擴增的溫度為 6262℃，電泳后出現梯形條帶，該結果說明 LAMP技術擴增得到的DNA不等長LAMP技術擴增得到的DNA不等長。
（4）將LAMP技術用于新冠病毒（SARS-CoV-2）的核酸檢測，先要進行如下操作：
| 實驗步驟 | 簡要操作過程 |
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采集樣本 采集樣本
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用醫用棉簽從上呼吸道采集咽拭子或鼻拭子，然后低溫封存并送檢測機構進行檢測 |
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提取RNA 提取RNA
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向樣本中加入Trizol裂解蛋白質成分，再加入氯仿并離心，吸取上層水相置于新的EP離心管中，加入等體積的異丙醇，離心棄上清液，加入乙醇洗滌，離心棄上清液，晾干后加入DEPC水解液破壞RNA水解酶。 |
| 合成cDNA | 向樣本中加入緩沖液、 逆轉錄酶、引物 逆轉錄酶、引物 和dNTP，在PCR儀中獲得cDNA產物。 |
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定；目的基因的篩選與獲取．
【答案】變性、復性、延伸過程的循環（或溫度循環）；dNTP；2條內部引物（或FIP、BIP）；促進鏈置換，增加模板數量；堿基互補配對；62；LAMP技術擴增得到的DNA不等長；采集樣本；提取RNA；逆轉錄酶、引物
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：31引用：2難度：0.5
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1．數字PCR技術是一種核酸分子絕對定量技術，其原理如圖所示。下列有關敘述正確的是（ ）
發布：2024/12/30 23:30:2組卷：7引用：2難度：0.6 -
2．科學家為了提高光合作用過程中Rubiaco酶對CO2的親和力，利用PCR定點突變技術改造Rubisco酶基因，從而顯著提高了植物的光合作用速率。請回答下列問題：
（1）PCR定點突變技術屬于（填“基因工程”或“蛋白質工程”）。可利用定點突變的DNA構建基因表達載體，常用將基因表達載體導入植物細胞，還需用到植物細胞工程中的技術，才能最終獲得轉基因植物。
（2）PCR過程所依據的原理是。利用PCR技術擴增，若將一個目的基因復制10次，則需要在緩沖液中至少加入個引物。
（3）目的基因進入受體細胞內，并在受體細胞內維持穩定和表達的過程稱為。科研人員通過實驗研究發現培育的該轉基因植株的光合作用速率并未明顯增大，可能的原因是。
（4）另有一些科學家利用生物技術將人的生長激素基因導入小鼠受精卵的細胞核中，經培育獲得一種轉基因小鼠，其膀胱上皮細胞可以合成人的生長激素并分泌到尿液中。有關敘述錯誤的是。
A．選擇受精卵作為外源基因的受體細胞是因為這種細胞的全能性最容易表達
B．采用DNA分子雜交技術可檢測外源基因在小鼠細胞內是否成功表達
C．人的生長激素基因能在小鼠細胞表達，說明遺傳密碼在不同種生物中可以通用
D．將轉基因小鼠體細胞進行核移植（克隆），可以獲得多個具有外源基因的后代發布：2025/1/16 8:0:1組卷：14引用：2難度：0.6 -
3．下列關于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ）
發布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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