CAV-2（犬2型腺病毒）弱毒株廣泛應用于基因治療載體和病毒活疫苗載體研究。該病毒的E3區為病毒復制的非必需區，構建缺失E3區的CAV-2載體，可以提高CAV-2外源基因容量。過程如圖。
（1）過程①中擴增E3區上/下游同源重組臂的技術為PCRPCR技術，該技術中用到的關鍵酶是taqDNA聚合（taq）taqDNA聚合（taq）酶。設計擴增上游同源重組臂的1對引物時，分別引入EcoRⅠ位點和KpnⅠ、SpeⅠ位點。設計下游同源重組臂的1對引物時，分別引入KpnⅠ位點和HindⅢ位點。在反應體系中加入CAV-2基因組DNA的作用 作為模板作為模板。
（2）過程②中，上游同源重組臂經EcoRⅠ/KpnⅠEcoRⅠ/KpnⅠ酶切，下游同源重組臂經KpnⅠ/HindⅢKpnⅠ/HindⅢ酶切，再將他們與經EcoRⅠ/HindⅢ酶切的Puc18質粒連接在一起，形成pUC-△E3質粒。
（3）過程③中，設計兩端引物時，都引入SpeⅠSpeⅠ位點，經酶切得到的含EGFP（增強綠色熒光蛋白）等序列的DNA片段A。DNA片段A和pUC-△E3質粒經SpeⅠ酶切后，連接在一起。因為 連接方向可能錯誤（自身環化）連接方向可能錯誤（自身環化），所以還需經過鑒定和篩選才能得到pUC-△E3-EGFP質粒。
（4）CAV-2感染犬腎上皮細胞后，導入pUC-△E3-EGFP質粒，經多次純化后，得到重組的CAV-2病毒，這種病毒的變異類型屬于 基因重組基因重組。
（5）基因工程應用過程中，外源基因可能會與感染轉基因生物的某些病毒雜交，從而重組出對人類或其他生物有害的病原體，這是引發了人們在 生物生物安全方面發生了激烈的爭論的原因之一。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】PCR；taqDNA聚合（taq）；作為模板；EcoRⅠ/KpnⅠ；KpnⅠ/HindⅢ；SpeⅠ；連接方向可能錯誤（自身環化）；基因重組；生物
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：7引用：1難度：0.7
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
發布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ）
發布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6