農桿菌是—種在土壤中生活的微生物，能在自然條件下侵染雙子葉植物和裸子植物，而對大多數單子葉植物沒有侵染能力。植物基因工程中常用含有重組Ti質粒的農桿菌和受體植物細胞的愈傷組織共培養，進行轉基因操作。現有一段抗除草劑基因編碼蛋白質的區域在克隆載體上，要將其轉入煙草細胞，得到抗除草劑的轉基因煙草。
（1）在構建表達載體的過程中，要先用限制酶對目的基因和Ti質粒進行切割，之后用連接酶連接形成重組質粒。科學家使用了兩種不同的限制酶分別切割目的基因和Ti質粒，原因是防止質粒自身環化，并保證目的基因以正確的方向與Ti質粒進行連接目的基因以正確的方向與Ti質粒進行連接。
（2）在以上重組質粒中，目的基因和抗卡那霉素抗性基因，都應該位于T-DNAT-DNA片段內，因為Ti質粒上只有T-DNA片段能夠整合到受體細胞的染色體DNA上Ti質粒上只有T-DNA片段能夠整合到受體細胞的染色體DNA上。
（3）將重組的Ti質粒轉入農桿菌可用Ca2+Ca2+處理。得到的農桿菌菌液和煙草細胞愈傷組織共培養一段時間后，將愈傷組織置于含有霉素霉素和除草劑的選擇培養基上進行組織培養，通過調整生長素和細胞分裂素（植物激素）的比例生長素和細胞分裂素（植物激素）的比例，使其脫分化、再分化形成轉基因植株群體P。
（4）轉入的除草劑抗性基因的遺傳符合孟德爾遺傳，且不考慮突變的情況下，讓轉基因植株P自交，F1株系分隔種植，得到的F1株系植株用除草劑處理，其中大多數株系抗性和非抗性的比例為3：1。有極少數株系不發生性狀分離，全是除草劑抗性植株，原因可能是有兩個基因分別轉入一對同源染色體上有兩個基因分別轉入一對同源染色體上。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】目的基因以正確的方向與Ti質粒進行連接；T-DNA；Ti質粒上只有T-DNA片段能夠整合到受體細胞的染色體DNA上；Ca2+；霉素；生長素和細胞分裂素（植物激素）的比例；有兩個基因分別轉入一對同源染色體上
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：14引用：1難度：0.7
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