研究發現，Ti質粒上的 vir 區對T-DNA的轉移是必不可少的，但不一定與T-DNA連在一起。根據這一原理，研究人員開發了雙元載體系統，包括微型 Ti質粒和輔助 Ti質粒（如圖）。利用雙元質粒，研究人員將抗草甘膦基因 cp4-epsps 導入大豆中，培育出抗除草劑（草甘膦）轉基因大豆。cp4-epsps 基因來源于細菌，其表達產物需引導至葉綠體中才能起作用，回答下列問題：
（1）為將cp4-epsps基因導入大豆細胞的葉綠體，將其與葉綠體轉運肽基因ctp融合，構建融合基因（下稱cc 基因）。構建融合基因時需要的酶是 限制酶、DNA連接酶限制酶、DNA連接酶。
（2）微型Ti質粒和輔助Ti質粒均比野生 Ti質粒小得多，優點是 質粒小，易于轉化（提高質粒的轉化率）質粒小，易于轉化（提高質粒的轉化率）。微型Ti質粒和輔助Ti質粒均刪除了生長素基因和細胞分裂素基因，這兩個基因轉染到水稻愈傷組織后不利于水稻愈傷組織的再分化，原因是 T-DNA中生長素基因和細胞分裂素基因在愈傷組織中表達，所產生的激素會影響愈傷組織的分化T-DNA中生長素基因和細胞分裂素基因在愈傷組織中表達，所產生的激素會影響愈傷組織的分化。
（3）構建cc基因表達載體時，應將 cc 基因導入 微型Ti質粒微型Ti質粒（填“微型 Ti質粒“或“輔助 Ti質粒“）；并轉化到大腸桿菌中；轉化后的大腸桿菌與含有另一種質粒的農桿菌混合，經溫育得到含雙元載體的農桿菌。對轉化后的大腸桿菌進行篩選時，培養基中應加入 卡那霉素卡那霉素。
（4）在對轉cp4-epsps 水稻進行檢測時發現葉肉細胞內有epsps蛋白，但水稻卻無草甘膦抗性，原因可能是 葉綠體轉運肽異常，不能引導epsps蛋白進入葉綠體葉綠體轉運肽異常，不能引導epsps蛋白進入葉綠體。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】限制酶、DNA連接酶；質粒小，易于轉化（提高質粒的轉化率）；T-DNA中生長素基因和細胞分裂素基因在愈傷組織中表達，所產生的激素會影響愈傷組織的分化；微型Ti質粒；卡那霉素；葉綠體轉運肽異常，不能引導epsps蛋白進入葉綠體
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：17引用：1難度：0.7
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
發布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ）
發布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6