2020年的諾貝爾生理學或醫學獎授予Harvey J.Alter博士、Michael Houghton博士和 Charles M.Rice博士,以表彰他們對丙肝病毒的重要發現。丙肝病毒(HCV)是一種RNA病毒,人們將得到的HCV的多個抗原基因首尾相連,連接在同一調控組件下,可構成HCV融合基因。經基因工程產生出的HCV融合抗原可用于制作第三代HCV抗體檢測試劑?;卮鹣铝袉栴}:
(1)獲得融合基因,即以相關的RNA為模板合成cDNA然后拼接起來,這個過程需要的酶有 逆轉錄酶、DNA連接酶逆轉錄酶、DNA連接酶。其次要利用PCR技術擴增融合基因,即先根據融合基因的核苷酸序列,設計并合成引物,若該融合基因的序列為
(虛線處省略了部分核苷酸序列),則PCR設計應選用的兩種引物的部分序列應分別為:①5'—AACTAT—3',②5'—AGAGGC—3'(或3'—CGGAGA—5')5'—AGAGGC—3'(或3'—CGGAGA—5')。引物能與變性的融合基因單鏈結合,在 Taq酶Taq酶催化作用下延伸,如此循環多次。
(2)構建表達載體,如圖所示,表達載體上除了標注的DNA片段外,在融合基因上游還必須擁有 啟動子啟動子,其作用是 是RNA聚合酶識別和結合的位點,驅動融合基因轉錄出mRNA是RNA聚合酶識別和結合的位點,驅動融合基因轉錄出mRNA
(3)用含 硫酸卡那霉素硫酸卡那霉素的培養基篩選出能生長的菌落。
(4)抗原蛋白是 HCV融合基因表達HCV融合基因表達的產物,將抗原蛋白注射到動物體內,通過 體液體液免疫過程產生抗體,可制作出第三代HCV抗體檢測試劑。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定.
【答案】逆轉錄酶、DNA連接酶;5'—AGAGGC—3'(或3'—CGGAGA—5');Taq酶;啟動子;是RNA聚合酶識別和結合的位點,驅動融合基因轉錄出mRNA;硫酸卡那霉素;HCV融合基因表達;體液
【解答】
【點評】
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發布:2024/6/27 10:35:59組卷:7引用:2難度:0.6
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