如圖是將乙肝病毒表面主蛋白基因HBsAg導入巴斯德畢赤酵母菌生產乙肝疫苗的過程圖。巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營養(yǎng)型酵母，能將甲醇作為其唯一碳源。該酵母菌體內無天然質粒，科學家改造出了圖1所示的pPIC9K質粒用作載體，其與目的基因形成的重組質粒經酶切后可以與酵母菌染色體發(fā)生同源重組，將目的基因整合于染色體中以實現(xiàn)表達。已知當甲醇作為唯一碳源時，該酵母菌中AOX1基因受到誘導而表達（5'AOX1和3'AOX1（TT）分別是基因AOX1的啟動子和終止子）。請分析回答：
（1）為實現(xiàn)HBsAg基因和pPIC9K質粒重組，應該選擇SnaBI AvrⅡSnaBI AvrⅡ切割質粒，并在HBsAg基因兩側的A和B位置接上相應的限制酶識別序列相應的限制酶識別序列，這樣設計的優(yōu)點是確保定向連接（避免質粒和目的基因自身環(huán)化及自連）確保定向連接（避免質粒和目的基因自身環(huán)化及自連）。
（2）酶切獲取HBsAg基因后，需用DNA連接酶DNA連接酶將其連接到pPIC9K質粒上，形成重組質粒，并將其導入大腸桿菌以獲取大量重組質粒大量重組質粒。
（3）步驟3中應選用限制酶BglⅡBglⅡ來切割重組質粒以獲得重組DNA，然后再將其導入巴斯德畢赤酵母菌細胞。
（4）為了確認巴斯德畢赤酵母菌轉化是否成功，在培養(yǎng)基中應該加入卡拉霉素卡拉霉素以便篩選：若要檢測轉化后的細胞中是否含有HBsAg基因轉錄產物，可以用分子雜交分子雜交方法進行檢測。
（5）轉化的酵母菌在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間后，需要向其中加入甲醇甲醇以維持其生活，同時誘導HBsAg基因表達。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】SnaBI AvrⅡ；相應的限制酶識別序列；確保定向連接（避免質粒和目的基因自身環(huán)化及自連）；DNA連接酶；大量重組質粒；BglⅡ；卡拉霉素；分子雜交；甲醇
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經書面同意，不得復制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：25引用：4難度：0.5
相似題
-
1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6