19世紀末，巴斯德開創了第一次疫苗革命，其特點是接種滅活或減毒的病原微生物。20世紀70年代開始，現代生物技術的迅猛發展開創了第二次疫苗革命，使疫苗的研制進入分子水平。圖1是通過基因工程制備乙型肝炎表面抗原（HbsAg）從而獲得乙肝疫苗的過程。
在圖1步驟①和③中，需要用合適的限制酶切割乙肝表面抗原基因和質粒。現將乙肝表面抗原基因及質粒的部分限制酶的識別序列及位置表示為圖2。質粒中的啟動子是質粒中基因得以正常表達所必需的部分。LacZ基因合成某種酶，該酶能將無色染料X-gal變成藍色，最終能在含無色染料X-gal的培養基上將含該基因的菌落染成藍色。
| 限制酶 | EcoRⅠ | BclⅠ | BamHⅠ | HindⅢ |
| 識別序列及切割位點 | 5'-G↓AATTC-3' | 5'-T↓GATCA-3' | 5'-G↓GATCC-3' | 5'-A↓AGCTT-3' |
無內含子、啟動子、終止子等序列
無內含子、啟動子、終止子等序列
，構建cDNA文庫第一步需要 逆轉錄
逆轉錄
酶。（2）為了避免自身環化及便于篩選，切割質粒選用的限制酶是
BamHⅠ和HindⅢ
BamHⅠ和HindⅢ
，切割乙肝表面抗原基因選用的限制酶是 BclⅠ和HindⅢ
BclⅠ和HindⅢ
。（3）為篩選含有乙肝表面抗原的大腸桿菌細胞，需要將導入操作之后的大腸桿菌接種到含
氨芐青霉素和無色染料X-gal
氨芐青霉素和無色染料X-gal
的固體牛肉膏蛋白胨培養基上，挑選 白色/未被染成藍色
白色/未被染成藍色
的菌落純化培養。（4）在圖1步驟④中，使用的基因工程工具酶是
DNA連接酶
DNA連接酶
。在一個乙肝表面抗原基因與一個質粒重組的過程中（圖1步驟④），游離的磷酸基團數目減少 4
4
個。（5）若運用PCR技術檢測乙肝表面抗原基因是否導入，需根據目的基因的序列設計
PCR引物
PCR引物
，利用待檢DNA為模板進行PCR。PCR過程包括多次循環，每個循環分為3個步驟：①變性
變性
②退火/復性
退火/復性
③延伸。（6）下列有關限制酶的敘述，錯誤的是
B
B
。A.限制酶催化的反應類型是水解反應
B.限制酶破壞的是氫鍵
C.一種限制酶只能識別雙鏈DNA中某種特定的脫氧核苷酸序列
D.EcoRⅠ與HindⅢ相比較，EcoRⅠ酶切后的DNA片段較容易分離
（7）基因工程的誕生，帶動了現代生物技術的迅猛發展，下列關于基因工程的敘述，正確的是
B
B
。A.以蛋白質的氨基酸序列為依據合成的目的基因與原基因的堿基序列相同
B.基因工程可以定向改造生物的性狀
C.基因工程經常以抗生素的抗性基因為目的基因
D.限制性核酸內切酶一般能識別多種核苷酸序列
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】無內含子、啟動子、終止子等序列；逆轉錄；BamHⅠ和HindⅢ；BclⅠ和HindⅢ；氨芐青霉素和無色染料X-gal；白色/未被染成藍色；DNA連接酶；4；PCR引物；變性；退火/復性；B；B
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：9引用：1難度：0.6
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6