為培育轉固氮基因的小麥新品種，科研人員利用土壤農桿菌的Ti質粒和普通質粒按如圖構建了雙元載體系統（Ti輔助質粒和T-DNA給體質粒），圖中vir基因編碼產物能激活T-DNA轉移，ori為復制原點，tmr和tms為致瘤基因，LB和RB為T-DNA兩端的重復序列，kan為卡那霉素抗性基因，ter為四環素抗性基因。如表是幾種限制酶識別序列及切割位點。請回答下列問題：
| 限制酶 | EcoRⅠ | BamHⅠ | Sau3AⅠ | BclⅠ | SmaⅠ | XmaⅠ |
| 識別序列及切割位點 | -G↓AATTC- | -G↓GATCC- | -↓GATC- | -T↓GATCA- | -CCC↓GGG- | -C↓CCGGG- |
（1）研究發現T-DNA的RB序列相當保守，是由于該序列的突變類型在
自然選擇
自然選擇
過程中被淘汰。（2）T-DNA轉移至植物細胞可使植物患“腫瘤”，研究發現“腫瘤”的發生與植物激素有關，據此推測T-DNA中致瘤基因tmr、tms可能與
生長素、細胞分裂素
生長素、細胞分裂素
等植物激素的合成有關。（3）為防止植物形成“腫瘤”，研究人員按如圖構建了雙元載體系統。圖中過程①需先用限制酶
SmaⅠ和BamHⅠ
SmaⅠ和BamHⅠ
處理Ti質粒以去除致瘤基因，再用 T4DNA連接
T4DNA連接
酶將經過處理的固氮基因接入Ti質粒，以構建重組質粒；過程②用限制酶 EcoRⅠ
EcoRⅠ
處理重組質粒，獲得含vir基因的DNA片段和含固氮基因的T-DNA，再經過程③、④分別構建Ti輔助質粒和T-DNA給體質粒。圖中過程④可以實現的原因是 A片段兩端的粘性末端相同
A片段兩端的粘性末端相同
。（4）科研人員用限制酶EcoRⅠ和Sau3AⅠ處理T-DNA給體質粒，完全酶切后可以得到含
3
3
條帶的凝膠電泳圖譜。（5）將構建的Ti輔助質粒和T﹣DNA給體質粒導入通過
感受態細胞法（或 Ca2+處理）
感受態細胞法（或 Ca2+處理）
方法處理的土壤農桿菌內，選擇在含有 卡那霉素
卡那霉素
的培養基上能形成菌落的土壤農桿菌去感染小麥細胞。該過程中T-DNA給體質粒并不含有vir基因，但仍能將轉化成功的原因是 Ti輔助質粒含有vir基因，其編碼的產物能促進T-DNA給體質粒中的T-DNA轉化成功
Ti輔助質粒含有vir基因，其編碼的產物能促進T-DNA給體質粒中的T-DNA轉化成功
。（6）種植轉基因固氮小麥，在環境保護上的重要意義有
減少氮肥的使用，減輕環境污染
減少氮肥的使用，減輕環境污染
。（答出一點即可）【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】自然選擇；生長素、細胞分裂素；SmaⅠ和BamHⅠ；T4DNA連接；EcoRⅠ；A片段兩端的粘性末端相同；3；感受態細胞法（或 Ca2+處理）；卡那霉素；Ti輔助質粒含有vir基因，其編碼的產物能促進T-DNA給體質粒中的T-DNA轉化成功；減少氮肥的使用，減輕環境污染
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：15引用：1難度：0.6
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6