苯丙酮尿癥是一種單基因遺傳病，由于PKU某因突變導致患者尿液中含有大量苯丙酮酸。基因定點整合可替換特定某因用于該病治療，即將正常PKU基因定點整合到PKU基因突變的小鼠胚胎干細胞的染色體DNA上，替換突變基因。簡要過程如圖所示。請回答下列問題：
注：圖中neoR為新霉素抗性基因，HB1和HB2為小鼠胚胎干細胞染色體DNA上突變的PKU基因兩側的一段DNA序列。
（1）構建重組載體時，需要根據HB1和HB2的堿基HB1和HB2的堿基序列分別合成HB1′和HB2′，在二者之間除了插入正常的PKU基因和neoR基因以外，還必須含有啟動子、終止子啟動子、終止子。此過程常用的工具酶有限制酶、DNA連接酶限制酶、DNA連接酶，neoR基因的作用是鑒定與篩選含有正常PKU基因的胚胎干細胞鑒定與篩選含有正常PKU基因的胚胎干細胞。
（2）可用顯微注射顯微注射技術將重組載體導入小鼠胚胎干細胞，誘導相應區域互換，完成胚胎干細胞的基因改造。胚胎干細胞的特點有能大量增殖；具有發育的全能性；能大量增殖；具有發育的全能性；、體積小、細胞核大、核仁明顯；在體外培養條件下，可以增殖而不發生分化體積小、細胞核大、核仁明顯；在體外培養條件下，可以增殖而不發生分化（答出兩點即可）。
（3）現用完成基因改造后的胚胎干細胞進行個體生物學水平鑒定，寫出鑒定思路、結果及結論：將該胚胎干細胞培育成小鼠，檢測小鼠尿液中苯丙酮酸含量，若小鼠尿液中不含大量苯丙酮酸，說明PKU基因成功表達，基因治療成功，反之，則不成功將該胚胎干細胞培育成小鼠，檢測小鼠尿液中苯丙酮酸含量，若小鼠尿液中不含大量苯丙酮酸，說明PKU基因成功表達，基因治療成功，反之，則不成功。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】HB1和HB2的堿基；啟動子、終止子；限制酶、DNA連接酶；鑒定與篩選含有正常PKU基因的胚胎干細胞；顯微注射；能大量增殖；具有發育的全能性；；體積小、細胞核大、核仁明顯；在體外培養條件下，可以增殖而不發生分化；將該胚胎干細胞培育成小鼠，檢測小鼠尿液中苯丙酮酸含量，若小鼠尿液中不含大量苯丙酮酸，說明PKU基因成功表達，基因治療成功，反之，則不成功
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：5引用：1難度：0.7
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（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6