科研小組利用基因工程技術將“抗蟲基因”轉入棉花細胞成功培育出抗蟲棉，該技術所用的含“抗蟲基因”的DNA與質粒上相關限制酶的酶切位點分別如圖1、圖2所示（不同限制酶的識別序列和酶切位點：BamHⅠ5′-G↓GATCC-3′，BclⅠ5′-T↓GATCA-3′，Sau3AⅠ5′-↓GATC-3′，HindⅢ5′-A↓AGCTT-3′）。請分析并回答以下問題：
（1）將抗蟲基因轉入棉花細胞前，可以通過PCR擴增獲得大量抗蟲基因，PCR擴增前應根據 目的基因兩側的脫氧核苷酸序列目的基因兩側的脫氧核苷酸序列設計引物。培育轉基因棉花的核心工作是 構建基因表達載體構建基因表達載體。由圖1和圖2分析可知，研究人員應選擇 HindIII和Sat3AIHindIII和Sat3AI限制酶處理含抗蟲基因的DNA片段，在處理質粒的時候應選擇 HindII和BamHIHindII和BamHI限制酶。
（2）蛋白酶抑制劑基因也是一種抗蟲基因，某研究團隊將胰蛋白酶抑制劑（NaPI）和胰凝乳蛋白酶抑制劑（StPin1A）的基因單獨或共同轉化，獲得轉基因植株。
①將抗蟲基因轉入植物體內時，除了采用我國科學家獨創的花粉管通道法，還可以采用 農桿菌轉化農桿菌轉化法，使用該方法時，應將抗蟲基因插入到質粒的 T-DNAT-DNA區域。
②標記基因可用于檢測目的基因是否導入，由圖2可知，應選含有 X抗生素X抗生素的培養基篩選含有重組質粒的細胞。為了檢測目的基因在受體細胞中是否穩定表達，在分子水平上的檢測方法為 抗原抗體雜交抗原抗體雜交。
③圖3為將胰蛋白酶抑制劑（NaPI）和胰凝乳蛋白酶抑制劑（StPin1A）的基因單獨或共同轉化的實驗結果，據結果分析，NaPINaPI（選填“NaPI”或“StpinlA”或“NaPI+StpinlA”）轉基因棉花的抗蟲效果最佳，得出該結論的原因是 飼喂NaPI轉基因的蟲體質量較對照組差，且每株棉鈴蟲數較對照組少飼喂NaPI轉基因的蟲體質量較對照組差，且每株棉鈴蟲數較對照組少。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】目的基因兩側的脫氧核苷酸序列；構建基因表達載體；HindIII和Sat3AI；HindII和BamHI；農桿菌轉化；T-DNA；X抗生素；抗原抗體雜交；NaPI；飼喂NaPI轉基因的蟲體質量較對照組差，且每株棉鈴蟲數較對照組少
【解答】
【點評】
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發布：2024/11/19 5:30:2組卷：41引用：2難度：0.5
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（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
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