為了研究視神經(jīng)病變誘導(dǎo)基因（OPTN）的分子機(jī)制，科研人員用OPTN基因的部分DNA片段構(gòu)建表達(dá)載體，導(dǎo)入細(xì)胞后轉(zhuǎn)錄出的RNA會(huì)抑制細(xì)胞中OPTN蛋白的合成。實(shí)驗(yàn)中使用的DNA片段和載體上限制酶的識(shí)別序列如下：
| 限制酶 | BglⅡ | BamHⅠ | HindⅢ | XhoⅠ |
| 識(shí)別序列和切割位點(diǎn) | A↓GATCT TCTAG↑A |
G↓GATCC CCTAG↑G |
A↓AGCTT TTCGA↑A |
G↓TCGAG GAGCT↑C |
（1）應(yīng)選用BamHⅠ和HindⅢ切割載體質(zhì)粒，理由是
目的基因片段和質(zhì)粒上均含有HindⅢ的酶切位點(diǎn)；BamHⅠ與BglⅠ處理產(chǎn)生的黏性末端相同；BamHⅠ和HindⅢ處理質(zhì)粒后能保證目的基因插入質(zhì)粒的啟動(dòng)子和終止子之間
目的基因片段和質(zhì)粒上均含有HindⅢ的酶切位點(diǎn)；BamHⅠ與BglⅠ處理產(chǎn)生的黏性末端相同；BamHⅠ和HindⅢ處理質(zhì)粒后能保證目的基因插入質(zhì)粒的啟動(dòng)子和終止子之間
。（2）重組質(zhì)粒上
無
無
（填“有”或“無”）BamHⅠ的識(shí)別序列，因此可通過酶切法鑒定質(zhì)粒是否重組成功，方法如下：用BamHⅠ和XhoⅠ兩種限制酶處理質(zhì)粒，未重組的質(zhì)粒將產(chǎn)生2
2
種片段，重組的質(zhì)粒將產(chǎn)生1
1
種片段。（3）重組質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞后，能抑制細(xì)胞中OPTN蛋白合成的原因是
重組質(zhì)粒中OPTN基因部分片段轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA與細(xì)胞中指導(dǎo)OPTN蛋白合成的mRNA互補(bǔ)結(jié)合，阻礙了翻譯過程的進(jìn)行
重組質(zhì)粒中OPTN基因部分片段轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA與細(xì)胞中指導(dǎo)OPTN蛋白合成的mRNA互補(bǔ)結(jié)合，阻礙了翻譯過程的進(jìn)行
。（4）要證明導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞中OPTN基因的表達(dá)受到抑制，需要設(shè)置
導(dǎo)入未重組質(zhì)粒（和未導(dǎo)入質(zhì)粒）的細(xì)胞
導(dǎo)入未重組質(zhì)粒（和未導(dǎo)入質(zhì)粒）的細(xì)胞
作為對(duì)照組。通常采用抗原-抗體雜交
抗原-抗體雜交
法檢測(cè)細(xì)胞中OPTN蛋白的表達(dá)水平。【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】目的基因片段和質(zhì)粒上均含有HindⅢ的酶切位點(diǎn)；BamHⅠ與BglⅠ處理產(chǎn)生的黏性末端相同；BamHⅠ和HindⅢ處理質(zhì)粒后能保證目的基因插入質(zhì)粒的啟動(dòng)子和終止子之間；無；2；1；重組質(zhì)粒中OPTN基因部分片段轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA與細(xì)胞中指導(dǎo)OPTN蛋白合成的mRNA互補(bǔ)結(jié)合，阻礙了翻譯過程的進(jìn)行；導(dǎo)入未重組質(zhì)粒（和未導(dǎo)入質(zhì)粒）的細(xì)胞；抗原-抗體雜交
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：10引用：1難度：0.7
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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