玉米是我國重要的糧食作物和飼料來源，低溫會影響玉米的產量和品質。研究者將從微生物中獲得的CSP（冷激蛋白）基因與玉米基因的ubi啟動子相連后構建基因表達載體，并將其導入玉米細胞中，獲得了具有低溫耐受性的玉米植株，過程如圖1所示。
（1）研究者提取玉米的DNA，利用PCR技術將ubi啟動子擴增出來。該過程需設計合適的引物，引物設計時需已知ubi兩端的一段序列ubi兩端的一段序列，為便于進行后續操作還在引物中添加了限制酶的識別序列。在反應體系內，至少需33次擴增才能獲得所需的ubi啟動子。
（2）圖1所示的流程圖中，過程①需限制酶和DNA連接酶限制酶和DNA連接酶的催化，獲得的ubi-CSP基因在構建基因表達載體時，在Ti質粒上的插入部位為T-DNA內部（且不破壞hpt）T-DNA內部（且不破壞hpt）。過程②需要用CaCl2溶液處理農桿菌，其目的是獲得感受態細胞獲得感受態細胞。過程③完成后，將玉米愈傷組織轉入含潮霉素潮霉素的培養基中進行篩選，篩選后的愈傷組織再經培育獲得轉基因玉米。
（3）研究者分別提取了野生型玉米及5株轉基因玉米的染色體DNA，用限制酶處理后進行電泳。電泳后的DNA與基因探針進行雜交，到圖2所示放射性檢測結果，該基因探針應為含放射性同位素標記的CSP基因含放射性同位素標記的CSP基因片段，實驗結果表明除植株3外，其他4株轉基因玉米中CSP基因均已整合到玉米染色體基因組中除植株3外，其他4株轉基因玉米中CSP基因均已整合到玉米染色體基因組中。
（4）在個體水平上對轉基因玉米植株進行低溫耐受性低溫耐受性實驗，可檢測CSP基因是否已在玉米中表達。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】ubi兩端的一段序列；3；限制酶和DNA連接酶；T-DNA內部（且不破壞hpt）；獲得感受態細胞；潮霉素；含放射性同位素標記的CSP基因；除植株3外，其他4株轉基因玉米中CSP基因均已整合到玉米染色體基因組中；低溫耐受性
【解答】
【點評】
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發布：2024/4/20 14:35:0組卷：22引用：3難度：0.6
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
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2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ）
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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