血凝素基因（HA）編碼的血凝素是構成流感病毒囊膜纖突的主要成分。成熟的血凝素包含HA1和HA2兩個亞單位，其中HA1含有病毒與受體相互作用的位點。IgGFc基因片段（長度為717bp）編碼人IgG抗體中的一段小肽，常作為融合蛋白標簽。蛋白質分泌依賴于信號肽的引導，本研究中用信號肽IL-2SS代替HA自身信號肽，科研人員嘗試構建IL-2SS/HA1/IgGFc融合蛋白表達載體，并導入大腸桿菌表達和分泌，請回答：
（1）流感病毒囊膜主要由 蛋白質和磷脂蛋白質和磷脂組成，囊膜上血凝素的合成場所在 宿主細胞的核糖體宿主細胞的核糖體。
（2）本實驗用信號肽IL-2SS代替HA自身信號肽有利于 融合蛋白表達并避免自身產生的融合蛋白與自身受體結合融合蛋白表達并避免自身產生的融合蛋白與自身受體結合，PCR擴增目的基因時應該選擇圖中引物 bb。
（3）設計引物時，不能包含基因HA1的終止密碼子的編碼序列，原因是 若設計引物是含有HA1的終止密碼子，則核糖體讀到終止密碼子時就停止翻譯，導致IgGFc基因不能正常表達若設計引物是含有HA1的終止密碼子，則核糖體讀到終止密碼子時就停止翻譯，導致IgGFc基因不能正常表達。引物序列的長度及 CG含量CG含量直接影響著PCR過程中退火溫度的設定。
（4）應選擇限制酶 EcoRVEcoRV來切割質粒A，然后直接將PCR產物與質粒A混合，同時加入 DNA連接DNA連接酶，使得目的基因與質粒A相連。若目的基因與質粒A正向連接，用BamHⅠ和SacⅠ同時切割重組質粒，完全酶切后的產物的長度約為 717717bp。
（5）融合蛋白中的標簽蛋白有利于目的蛋白的分離和純化，基因工程生產HA1作為疫苗時，選擇人IgGFc作為標簽的優點還有 人體自身即可產生IgG抗體，避免了制作單克隆抗體的復雜過程人體自身即可產生IgG抗體，避免了制作單克隆抗體的復雜過程。
【考點】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】蛋白質和磷脂；宿主細胞的核糖體；融合蛋白表達并避免自身產生的融合蛋白與自身受體結合；b；若設計引物是含有HA1的終止密碼子，則核糖體讀到終止密碼子時就停止翻譯，導致IgGFc基因不能正常表達；CG含量；EcoRV；DNA連接；717；人體自身即可產生IgG抗體，避免了制作單克隆抗體的復雜過程
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：56引用：6難度：0.9
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