乳酸菌是乳酸的傳統生產菌，但耐酸能力較差，影響產量。釀酒酵母耐酸能力較強，但不產生乳酸。研究者將乳酸菌的乳酸脫氫酶基因（LDH）導入釀酒酵母，獲得能產生乳酸的工程菌株。如圖1為乳酸和乙醇發酵途徑示意圖，圖2為構建表達載體時所需的關鍵條件。

（1）乳酸脫氫酶在轉基因釀酒酵母中參與厭氧發酵的場所應為

細胞質基質

細胞質基質

。
（2）獲得轉基因釀酒酵母菌株的過程如下：
①設計引物擴增乳酸脫氫酶編碼序列。
為使擴增出的序列中編碼起始密碼子的序列由原核生物偏好的GTG轉變為真核生物偏好的ATG，且能通過雙酶切以正確方向插入質粒，需設計引物1和2。其中引物1的5′端序列應考慮

包含BamHI的識別序列

包含BamHI的識別序列

和

將GTG改為ATG

將GTG改為ATG

。
②將上述PCR產物和質粒重組后，導入大腸桿菌，篩選、鑒定，擴增重組質粒。重組質粒上有

原核生物復制原點

原核生物復制原點

，所以能在大腸桿菌中擴增。啟動子存在物種特異性，易被本物種的轉錄系統識別并啟動轉錄，因此重組質粒上的乳酸脫氫酶編碼序列

不能

不能

（能/不能）在大腸桿菌中高效表達。
③提取重組質粒并轉入不能合成尿嘧啶的釀酒酵母菌株，在

缺失尿嘧啶

缺失尿嘧啶

的固體培養基上篩選出轉基因釀酒酵母，并進行鑒定。
（3）以葡萄糖為碳源，利用該轉基因釀酒酵母進行厭氧發酵，結果既產生乳酸，也產生乙醇。若想進一步提高其乳酸產量，下列措施中不合理的是

B

B

（單選）。
A.進一步優化發酵條件
B.使用乳酸菌LDH基因自身的啟動子
C.敲除釀酒酵母的丙酮酸脫羧酶基因
D.對轉基因釀酒酵母進行誘變育種