研究表明EPA（二十碳五烯酸）能促進體內飽和脂肪酸代謝，具有降低血液黏稠度、預防心腦血管疾病的功效。研究人員利用轉基因技術從海洋生物中提取了EPA合成途徑的關鍵基因pfaB，并采用合理且表達效率最高的方案構建基因表達載體，將其導入酵母菌內，通過酵母菌發酵生產EPA。圖1表示目的基因（pfaB 基因）及其上的限制酶酶切位點，圖2表示質粒的結構示意圖。請回答下列問題：

EcoRⅠ	HindⅢ	BamHⅠ	SmaⅠ
5′-G↓AATTC-3′ 3′-CTTAA↑G-5′	5′-A↓AGCTT-3′ 3′-TTCGA↑A-5′	5′-G↓GATCC-3′ 3′-CCTAG↑G-5′	5′-CCC↓GGG-3′ 3′-CCC↑GGG-5′

（1）根據圖1分析，利用PCR擴增pfaB基因時所選用的引物是

引物4和引物5

引物4和引物5

，理由是

利用pcr擴增目的基因時，子鏈的延伸方向是5’端向3’端，擴增產物應該包含酶切位點序列

利用pcr擴增目的基因時，子鏈的延伸方向是5’端向3’端，擴增產物應該包含酶切位點序列

。
（2）根據圖1和圖2分析，構建表達效率最高的基因表達載體時，應選擇

BamHⅠ和HindⅢ

BamHⅠ和HindⅢ

酶分別切割含目的基因的DNA和質粒，目的是

避免目的基因和質粒自身環化，防止目的基因與質粒反向連接

避免目的基因和質粒自身環化，防止目的基因與質粒反向連接

。
（3）目的基因的檢測時，采用PCR等技術可檢測

pfaB基因是否插入酵母菌染色體中及是否表達

pfaB基因是否插入酵母菌染色體中及是否表達

。（答出2點）