一種天然蛋白t-PA能高效降解因血漿纖維蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和腦血栓的急救藥，但是心梗患者注射大劑量的t-PA會誘發顱內出血。研究證實，將t-PA蛋白第84位的半胱氨酸換成絲氨酸，能顯著降低其誘發出血的副作用。據此，先對天然t-PA基因的堿基序列進行改造，然后再采取傳統的基因工程方法表達該改造后的基因，可制造出性能優異的改良t-PA蛋白。如圖表示相關的目的基因、載體及限制酶識別序列和切割位點，pCLY11為質粒，請回答下列問題：
（1）可以先提取細胞的 mRNAmRNA來合成總cDNA，再從cDNA文庫中獲取t-PA基因。通過改造t-PA基因制造出性能優異的改良t-PA蛋白的過程被稱為 蛋白質蛋白質工程。
（2）若改造后的t-PA基因的黏性末端如上圖所示，則需要選用限制酶 XmaⅠ和BglⅡXmaⅠ和BglⅡ切割質粒pCLY11，保證質粒與t-PA改良基因高效連接。再用DNA連接酶催化形成 磷酸二酯磷酸二酯鍵，構建重組質粒。
（3）以大腸桿菌作為受體細胞，在含新霉素的培養基中形成菌落的受體細胞并非都是目的菌株，原因是 導入未連目的基因的質粒的大腸桿菌也可以在這種培養基上生長導入未連目的基因的質粒的大腸桿菌也可以在這種培養基上生長。成功獲取能生產改良t-PA蛋白的工程菌株后，利用 液體液體（填“固體”或“液體”）培養基在發酵罐中進行大量生產。
（4）除了用工程菌株，還可以用下列方法從轉基因牛乳汁中獲得改良t-PA蛋白：
過程②常用的方法是 顯微注射法顯微注射法；在過程④前需要取囊胚的 滋養層滋養層細胞做DNA分析進行性別鑒定；為了保證t-PA改良基因能在乳腺細胞中表達，構建基因表達載體需要將其與 乳腺蛋白基因的啟動子乳腺蛋白基因的啟動子等調控元件重組在一起。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】mRNA；蛋白質；XmaⅠ和BglⅡ；磷酸二酯；導入未連目的基因的質粒的大腸桿菌也可以在這種培養基上生長；液體；顯微注射法；滋養層；乳腺蛋白基因的啟動子
【解答】
【點評】
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發布：2024/4/20 14:35:0組卷：23引用：2難度：0.4
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（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
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（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
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