番茄幼苗抗寒能力弱，為提高番茄植株的抗寒性，科學家利用基因工程將耐寒蛋白基因（LEA基因）導入番茄細胞中獲得轉基因植株。如圖為Ti質粒和LEA基因的酶切位點，其中酶A、B、C均為限制性內切核酸酶。回答下列有關基因工程的問題：
（1）獲取LEA基因的方法有 PCR技術、人工合成法和構建基因文庫PCR技術、人工合成法和構建基因文庫（答出兩種）。將Ti質粒和LEA基因構建成基因表達載體需要利用酶 B和酶CB和酶C切割DNA，目的是 保證LEA基因插入T-DNA中并整合到番茄細胞染色體的DNA上；防止Ti質粒和LEA基因自身環化；防止目的基因反向連接保證LEA基因插入T-DNA中并整合到番茄細胞染色體的DNA上；防止Ti質粒和LEA基因自身環化；防止目的基因反向連接（答出兩點）。
（2）Ti質粒中的氨芐青霉素抗性基因的作用是 篩選出含有目的基因（LEA基因）的重組質粒篩選出含有目的基因（LEA基因）的重組質粒。構建好的基因表達載體導入土壤農桿菌前，需要用含Ca2+的溶液處理土壤農桿菌，目的是 使土壤農桿菌處于一種易于吸收周圍環境中DNA分子的生理狀態使土壤農桿菌處于一種易于吸收周圍環境中DNA分子的生理狀態。
（3）將導入基因表達載體的土壤農桿菌與番茄根尖或莖尖制成的愈傷組織混合培養，最終可獲得番茄植株，該過程利用了 植物組織培養植物組織培養技術。為確保獲得的番茄植株是抗寒性較強的轉基因番茄植株，可在分子水平上進行 抗原一抗體雜交抗原一抗體雜交，檢測LEA基因是否翻譯成耐寒蛋白，也可對獲得的番茄植株進行耐寒性實驗。
【考點】基因工程的操作過程綜合；植物的組織培養．
【答案】PCR技術、人工合成法和構建基因文庫；B和酶C；保證LEA基因插入T-DNA中并整合到番茄細胞染色體的DNA上；防止Ti質粒和LEA基因自身環化；防止目的基因反向連接；篩選出含有目的基因（LEA基因）的重組質粒；使土壤農桿菌處于一種易于吸收周圍環境中DNA分子的生理狀態；植物組織培養；抗原一抗體雜交
【解答】
【點評】
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發布：2024/7/21 8:0:9組卷：4引用：2難度：0.6
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
發布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ）
發布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6